采用等温滴定量热技术（ITC）和表面电浆共振技术.pdfVIP

采采用等温滴定量热技术(用等温滴定量热技术(IITCTC))和表面电浆共振技术和表面电浆共振技术 应 用 (SSPRPR))针对癌症的治疗性抗体药物的开发研究针对癌症的治疗性抗体药物的开发研究 文 Muneera Beach†, Verna Frasca†, and Stephen Demarest‡. †MicroCal Products Group, GE Healthcare, 22 Industrial Drive East, 献 Northampton, MA . ‡BiogenIdec, 5200 Research Place, San Diego, CA 23 介介 绍 绍 揭开信号、激活和调控中所涉及的生物过程中的分子间的相互作用的详细知识是非常重要的。此外，特别是如果这些过 程涉及疾病，在分子水平上观察这些过程的能力，以及开发出有利于对这些过程进行干预的方法，就显得尤为重要。ITC和 SPR都是在分子水平上观察生物过程的相互作用的有用工具。在这里，我们描述了利用ITC和SPR研究胰岛素样生长因子(IGF-1 和IGF-2)与其胰岛素样生长因子受体(IGF-1R)的结合。我们进一步描述了美国CA圣地亚哥Biogen Idec公司的Stephen Demars 和他的同事们使用这些技术，来定性对一系列内部开发的抗体不同的抑制机制，目标是开发用于临床应用的最佳治疗分子。 IGF-1R是一个较大的酪氨酸激酶(RTK)跨膜蛋白的受体，能够在大多数体细胞表达。IGF-1R结合构配体IGF-1和IGF-2而被 激活。IGF-1R的配体结合到细胞外域，导致细胞质酪氨激酶区域的激活，受体自磷酸化作用，下游靶标的磷酸化，如胰岛素 受体底物1(IRS-1)，同源性胶原域蛋白质(SHC) (1,2) 。IGF-1R被作为在各种癌症的增长中重要调停者(1,2) ，其活性也被认为与肿瘤 转移(2,3)有重要的牵连。人源IGF-1R是一个1368个氨基酸的蛋白质，对其主要结构和三级结构进行了相关表征(4,5) 。N端区域 (1-903残基)在细胞外和6个不同的蛋白质结构域组成：N-末端受体L域(L1)，富含半胱氨酸的重复域(CRR)，第二个受体L域(L2) 和III型纤连蛋白结构域，表示为FnIII-1 ，FnIII-2和FnIII3。类似胰岛素受体(IR)，IGF-1R胞外区是负责本构二聚化的一个大的蛋 (6) 白质界面，其中包括L1，L2 FnIII-1，FnIII-2 。 针对IGF-1R的若干抑制性的治疗抗体已进入到II / III期临床试验，人体临床试验的初步结果是令人鼓舞的(1,7) 。从发布的 临床试验结果表明：这些抗体的活性和毒性之间的细微差别，这可以归因于不同的活性机制。采用ITC和SPR，我们可以显示： 抑制抗IGF-1R抗体可以阻止一个或两个配体的变构象的竞争，这取决于他们的各种抑制抗原表位的识别。研究抑制抗-IGF-1R 的抗体的结构与功能的关系(SAR)，在这里为有希望的临床实验中，这些治疗性抗体的活性和安全性的差异，提供了有价值 的、更深层次的见解。 材材料和方法料和方法 蛋白 重组hIGF-1R （1-903），hIGF-1R （1-903）-FC ，hIGF- 到受体以2:1饱和到受体结合位点，随后用IGF-1进行第二组 1R （1-462）-FC ，mIGF1-1R （1-904）-FC ，由subcloningeach 滴定。采用GE医疗所提供的Origin ITC数据分析软件进行数 的外域次序所描述（* ）。基因编码人源IGF-1和IGF-2与标签 据的积分分析。 组氨酸的基因被克隆、表达，纯化如前所述 （8 ）。 hIGF-IR (1-903)-Fcwere由两个鼠免疫和随后的杂种细胞产生机制在 体外库/噬菌体显示产生抗体，如前面所述 （8 ）。 表面电浆共振SPR 所有的SPR实验采用Biacore™3000(GE Healthcare)进行，