氧化铝膜（Anopore）在细胞培养中的应用.pdfVIP

GE Healthcare Life Sciences 氧化铝膜（Anopore ）在细胞培养中的应用 Anopore 氧化铝膜是GE 医疗集团生命科学部Whatman 膜产品家族中最特殊的商业化无 机膜，它诞生于上世纪80 年代末。Anopore 独特孔隙结构既是各种实验室的理想过滤介质 （如图1），还在细胞培养、药物测试、纳米技术等领域广泛应用。Anopore 的孔密度极高， 现有200nm、100nm 和20nm 三种标准孔径，每个孔之间无横向交叉，自身蛋白吸附率极低， 荧光背底非常小，也是扫描电子显微镜（SEM ）理想射线稳定衬底。因为Anopore 不含细胞 毒素，刚性表面支持细胞的附着和迅速生长，湿润 时呈透明状，在光学显微镜下极易观察，既适合荧 光和免疫荧光染色技术，又适合电子显微镜原位成 像，它兼容现有的DNA 提取技术，为细胞培养及其 分析提供了极大的便利。 除了常规细胞培养的应用外，Whatman 氧化铝 膜（Anopore ）还可用于一些比较特殊的应用，分别 是：抗生素敏感性实验 （AST ）、快速药物敏感性测 试 （DST）和模拟环境 图1 Anopore 膜电子显微镜照片 样品的组织培养嵌入法 （Tissue Culture Insert ）。 药物敏感性试验通常用于了解病原微生物对各种抗生素的敏感或耐受程度来指导临床 用药。致病微生物在Anopore 氧化铝膜上比其他方式培养生长不易受到限制，有效缩短了培 [1] 养时间。瑞士Wageningen 大学C. J. Ingham 等 首次利用0.2μm 孔径的Anopore 氧化铝膜成 功实施细菌抗生素敏感性试验。首先将灭菌的Anopore 放在内含抗生素的琼脂板上，接下来 o 在Anopore 上接种待测细菌或真菌，置于CO2 培养箱中于37 C 培养40min 或数小时，然后 用荧光染料 Fun-1 利用Anopore 毛细作用对细胞染色，最后直接用显微镜观察。研究发现， 白色念球菌在Anopore 表面可在60min 内检测到生长，毛癣菌则在6h 后检测到生长，检测 MIC 值都与E 试验法相当而检测时间更短，图2 是Anopore 上致病微生物成像照片。 图2 （A ）荧光染色大肠杆菌 （B）志贺氏菌在Anopore 膜上的SEM 形貌 （C ）荧光染色热带念球菌 （D） 伸长型志贺氏菌萌芽管形貌 Anopore 还可以缩短总的药物敏感性测试时间，因为致病微生物可在氧化铝膜（Anopore ） [2] 上直接实施培养、杀死、染色和成像等步骤。C. J. Ingham 等 运用0.2μm 孔径的 Anopore 培养接种高传染性的结核杆菌（Mycobacterium tuberculosis ），其中在Anopore 上加入常规 培养基（LJ ）和75%甘油供细菌生长，这种方法最大程度缩短了测试时间（3 天），将感染 性废弃物降至最小（2000 个菌株形成单元），同时在Anopore 膜上做荧光染色和扫描电镜 分析也极为方便 （如图3 ）。 GE Healthcare Life Sciences 图3 结核杆菌在Anopore 表面生长的电子显微镜照片 未来微生物多样性的研究将成为热点，但绝大多数细菌在标准培养方法中无法培养，比 如标准实验室法培养出的土壤细菌不到1%。2002 年以来，科学家们采用稀释培养基、增加 接种次数、模拟自然环境等来解决上述问题，特别是模拟自然环境法已从培养海水中难以培 养的微生物发展到培养土壤细菌中来，基于组织培养嵌入（TCI）的土壤基底膜系统法（SSMS ） 是目前最有效的培养土壤细菌的方法之一。 [3] 澳大利亚New South Wales 大学Belinda C Ferrari 等 运用20nm 孔径的Anopre 膜作为 TCI 多孔板，先在Anopore 孔内填充环境土壤细浆料形成组织培养嵌入（TCI ），接着把接种 物转移到聚碳酸酯膜（