一株传染性软化病病毒的分离和鉴定.pdfVIP

第 23 卷 　第 2 期 病 　　毒 　　学 　　报 Vol . 23 　 No . 2 　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　 2 0 0 7 年 3 月 CH IN ESE J OU RN AL O F V IROL O GY March 　 　2007 一株传染性软化病病毒的分离和鉴定 1 1 2 1 1 1 陆奇能 ,朱宏杰 ,洪健 ,金伟 ,张凡 ,鲁兴萌 ( 1. 浙江大学 　动物科学学院　无脊椎动物病理学研究室 , 浙江 　杭州 　3 10029 ; 2 . 浙江大学 　分析测试中心 , 浙江 　杭州 　3 10029) ( 摘要 :病毒性软化病是一种严重影响蚕业生产的流行病 ,其病原为家蚕传染性软化病病毒 B om by x m ori infectiou s flacherie viru s , Bm IFV) 。本实验室在浙江省收集到具有软化病症状的家蚕幼虫 ,并分离纯化获得一株病毒 。电镜 观察到病毒粒子为直径 26nm 左右 、无包涵体的球状颗粒 。病毒添食四龄起蚕和五龄起蚕 ,分别在 3 ～ 4d 和 5 ～ 7d 出现明显症状和病变 。纯化病毒 SD SPA GE 条带与Bm IFV 蛋白相仿 。病毒核酸鉴定为 RN A ,并可用套式 R T PCR 扩增出特异性片段 ,测序发现片段序列和 Bm IFV 日本坂城株的同源性为 99 . 5 % 。由此可确定该病毒为Bm I FV ,这是我国首次分离到该病毒 ,暂命名为 Bm IFVC HN00 1 。 关键词 :家蚕 ;传染性软化病病毒 ;分离鉴定 ( ) 中图分类号 :S8845 　　文献标识码 :A 　　文章编号 :1000872 1 2007 020 14305 　　软化病是一种严重影响蚕业生产的流行病 ,其 家蚕品种 。作为世界最大养蚕国 ,我国具有 Bm IFV 病因曾被认为是细菌感染和生理不适 , Paillot 最早 最大的易感群体[ 8 ,9 ] ,夏秋蚕饲养中不明原因的软 推测家蚕软化病 由病毒引起[ 1 ] 。1960 年 日本学者 化病是一种常见的病害 , 因此分离和鉴定 Bm IFV 山崎等从大量发生软化病的长野县农家收集病蚕 , 对我国养蚕业具有十分重要的意义 。 并通过添食试验认为是病毒引起的病毒性软化病 , 或称传染性软化病[ 1 ] 。Aizawa 应用 CsCl 密度梯度 材料与方法 超速离心技术得到了较纯的坂城株病毒 , 电子显微 ( ) 1 　病原与试剂 　从浙江桐乡养蚕农户处取外观病征疑似病 镜观察到直径为 26nm ,呈正 20 面体 球状 的病毒 粒子 , 并将 病 毒称 为 : 家蚕传 染 性 软化病 病 毒 蚕 ,用其中肠作为病料 ,实验室添食健康家蚕 ,出现相同症状 后进行病毒的繁殖和分离 。添食感染实验所用蚕种为 :秋丰 (B om