1、免疫检测的基础知识1.docVIP

1、免疫检测的基础知识 1 1.1　抗原 1 1.2　抗体 1 1.2.1　抗体的结构 1 1.2.2 　抗体的产生 2 1.3　抗原抗体反应 2 1.3.1　可逆性 2 1.3.2　最适比例 2 1.3.3　特异性 3 1.3.4　敏感性 3 1.4　免疫测定在临床检验中的应用 3 1.5． 标记的免疫测定 3 1.6． 酶免疫测定 3 2、ELISA的原理和类型 5 2.1.　ELISA的原理 5 2.2.　ELISA的类型 5 2.2.1　双抗体夹心法测抗原 5 2.2.2 双抗原夹心法测抗体 6 2.2.3 间接法测抗体 6 2.2.4 竞争法测抗体 7 2.2.5 竞争法测抗原 7 2.2.6 捕获包被法测抗体（经典方法） 7 2.2.7 ABS-ELISA法 8 3、ELISA的试剂 8 3.1　免疫吸附剂 9 3.1.1　固相载体 9 3.1.2 包被的方式 10 3.1.3 包被用抗原 10 3.1.4 包被用抗体 10 3.1.5 包被的条件 11 3.1.6 封闭 11 3.2 酶联物（结合物） 11 3.2.1酶 11 3.2.2 抗原和抗体 12 3.2.3 结合物的制备 12 3.2.4　结合物的保存 12 3.2.5 　结合物的稀释液 13 3.3 　酶的底物 13 3.3.1 　HRP的底物 13 3.3.2　AP的底物 13 3.4 　洗涤液 13 3.5 　酶反应终止液 13 3.6　阳性对照品和阴性对照品 14 3.7　参考标准品 14 4、ELISA的操作要点 14 4.1 标本的采取和保存 14 4.2 试剂的准备 14 4.3 加样 15 4.4 保温 15 4.5 洗涤 15 4.6 显色和比色 16 4.6.1 显色 16 4.6.2 比色 16 4.6.3 酶标仪 16 4.7 结果判断 17 4.7.1 定性测定 17 4.7.2 定量测定 18 5、有关质量控制问题 18 5.1 基本概念 18 5.1.1 质量控制（Quaility Control,Q.C） 18 5.1.2 误差 19 5.1.3 正态分布及标准差 19 5.1.4 真值 19 5.1.5 准确度（accuracy） 20 5.1.6 精密度（Precision） 20 5.1.7 标准品 20 5.1.8 临床决定性水平（clinical decision leuel） 20 5.2质量控制血清 20 5.2.1 质控血清的使用 20 5.2.2 临界值质控血清 20 5.2.3 质控血清的制备 20 5.3 室内质量控制程序 21 5.3.1 最佳条件下已知值质控血清变异（optimal conditions variance,简称OCV）的测定 21 5.3.2常规条件下已知值质控血清变异（routine conditions variance-known value,简称RCVK）的测定。 21 5.3.3常规条件下,未知值质控血清变异(routine conditions variancl-unknown value 简称RCVU)的测定 21 5.3.4质控图 21 5.3.5统计学计算方法--即刻性质控 22 5.4室间质量评价（external quality assessment,简称EQA） 22 6、ELISA试剂的临床质量评价 23 6.1　诊断试剂临床质量评价要点 23 6.2　临床考核血清盘的制备要求 23 6.3　临床考核血清盘的建议 23  1、免疫检测的基础知识 　　ELISA是一种免疫测定。免疫测定（immunoassay，IA）是应用免疫学技术测定标本的方法。在临床检验中主要通过抗原抗体反应检测体液中的抗体或抗原性物质。 1.1　抗原 　　抗原是能在机体中引起特异性免疫应答的物质。抗原进入机体后，可刺激机体产生抗体和引起细胞免疫。在免疫测定中，抗原是指能与抗体结合的物质。能在机体中引起抗体产生的抗原多为分子量大于5000的蛋白质。小分子化合物在与大分子蛋白质结合后能引起机体产生特异性抗体的，称为半抗原（hapten）。例如某些激素、药物等。抗原的反应性取决于抗原决定簇（antigenic determinant），或称为表位（epitope）。一个抗原分子可带有不同的决定簇。 1.2　抗体 1.2.1　抗体的结构 　　抗体是能与抗原特异性结合的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。Ig分五类，即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。与免疫测定有关的Ig主要为IgG和IgM。Ig由两个轻链（L）和两个重链（H）的单体组成。Ig的轻链是相同的，有κ（kappa）和λ（Lambda）两种型别。五类Ig的重链结构不同，这决定了它们的抗原性也不同。IgG和Ig