白灵芝总糖和粗蛋白含量的测定与测定方法的比较论文.docVIP

白灵芝总糖和粗蛋白含量的测定与测定方法的比较 田晓琳 摘要 目的 探讨白灵芝中的总糖和蛋白质含量的测定及测定方法的比较。方法 测定白灵芝的方法有硫酸—苯酚法和硫酸—蒽酮法，3,5—二硝基水杨酸法；蛋白质的测定有多种方法，如折射率法，紫外吸收法，凯氏定氮法等方法。本文分别用硫酸—苯酚法和3,5—二硝基水杨酸法测定总糖；紫外吸收法，双缩脲法及考马斯亮蓝法来快速测定白灵芝中蛋白质的含量，探讨了两种快速测定总糖和蛋白质含量的方法，在测定方面的区别，并对两种方法进行具体的分析比较。结果3,5—二硝基水杨酸法是测定多糖含量较理想的方法；而考马斯亮蓝是测定蛋白质含量较灵敏和理想的方法。 关键词 白灵芝 多糖 蛋白质 测定方法 　白灵芝又名玉芝Polyporus lucidum Leyss. Fr。Ganodermalucidum(LeysslexFrl)Karstl或紫芝GanodermasinenseZhaolXuetZhang的干燥子实体[1]．其化学成分复杂，目前已知主要含有多糖(肽)类、三萜类、核苷类等[2]。辛平无毒，主治咳逆上气，益肺气，通利口鼻，强志意，安魄）。抱朴子中描述白芝如截肪，因此苦白蹄可能为此类。这种真菌菌肉质白，如马蹄状，大者可数斤，生于松树和其他针叶树上。野生白灵芝又名苦白蹄，采自长白山区,菌肉洁白，味奇苦，为灵芝罕见品种。对心血管疾病有特效，祛风除湿，止血、化痰，抗癌。 主治心脑血管病症、高血脂、动脉硬化、冠心病；贫血、神经衰弱、哮喘、气管炎、前列腺炎、尿急尿频；肝癌、食道癌、胰腺癌、胃癌、乳腺癌、肺癌、鼻咽癌；急慢性肝炎、早期肝硬化、风湿病、消化道溃疡、肺结核等。改善睡眠，排毒、美容、提高免疫力及滋补强身等。白灵芝野生平盖灵芝含麦含角甾醇、有机酸、D-甘露糖、氨基葡萄糖、多糖类、甘露醇、脂肪酸、氨基酸、多肽、葡萄糖胺、腺嘌呤、腺苷、尿嘧啶、内酯、香豆精、三萜类以及多种酶类和多种微量元素，其中有机锗含量高达1238ppm,有机硒含量也很高白灵芝有抗癌保健之功效。是美容养颜的极品之选。白灵芝有护肾、益功效，是好的上等补品ρ=1.18g/ml. 浓硫酸：ρ=1.84g/ml. 50g/L苯酚溶液：称曲5g苯酚（C6H6O，重蒸）,用于溶解于100ml容量瓶中，定容后摇匀。至棕色瓶，置4℃冰箱中避光贮存。 100mg/L葡萄糖标准溶液：将葡萄糖于105℃恒温烘干至恒重，称取葡萄糖约0.1g（精确至0.0001g），用于溶解于1000ml容量瓶中，定容至刻度后摇匀，置4℃冰箱中贮存，两周内有效。 100mg/L标葡萄糖溶液：称取0.100?0g葡萄糖（5.5）于100mL烧杯中，加水溶解，定容至1000mL，置4℃冰箱中贮存。1 mg/ml葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即含葡萄糖为1.0mg/ml。 3,5—二硝基水杨酸试剂称取6.3 g 3,5—二硝基水杨酸并量取262 ml 2mol/L NaOH加到酒石酸钾纳的热溶液中（182 g酒石酸钾纳溶于500 ml水中），再加5 g结晶酚和5 g亚硫酸氢钠溶于其中，搅拌溶解，冷却后定容到1000 ml贮于棕色瓶中。5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。 6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。 0.1% 酚酞指示剂:1g酚酞溶于95%的乙醇中然后定容至100ml。　6 mol/L HCl溶液标准蛋白质溶液准确称结晶牛血清白蛋白配制成浓度为1mg/ml 的溶液。待测蛋白质溶液：浓度为1mg/ml 左右的蛋白质溶液。nm处所对应的吸光值 试管 1 2 3 4 5 6 葡萄糖质量（mg） 0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1 λ=490nm处吸光值 1.062 0.186 0.432 0.587 0.818 1.062 1.3.1．1.4测定 准确吸取试样测试液和蒸馏水0.2ml分别放于10ml具塞试管，都用蒸馏水补至1.0ml，按1.3.4步骤操作，以空白溶液调零，测得吸光度，以标准曲线计算总糖含量[4]。 ?精密度 在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于10%，以大于10%的情况不超过5%为前提。 3,5－二硝基水杨酸法 ? 在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量[6]。 1.3.1.2.1葡萄糖标准曲线制作 取9支15mm×180mm试管，按表2加入1.0mg/