番茄青枯病生防菌ANTI-8098A生防机理的初步研究.pptVIP

番茄青枯病生防菌ANTI-8098A生防机理的初步研究 姓 名：张 彦 专 业：植物病理学 指导老师：唐乐尘教授 刘 波研究员 一、研究背景 一、研究背景 一、研究背景 二、研究意义 二、研究意义 二、研究意义 三、研究内容与研究方法 ANTI-8098A:pCM20与亲本菌株异质性比较 通过不同培养温度、通气量和初始pH值等条件对ANTI-8098A:pCM20与亲本菌株的生长状况、培养过程pH值、OD值、菌体数量的影响，研究转化前后菌株的微生物学差异； 通过抑菌圈和盆栽苗的生物测定试验，比较转化前后菌株的抑菌活性的变化 。 三、研究内容与研究方法 三、研究内容与研究方法 三、研究内容与研究方法 ANTI-8098A:pCM20对番茄根际土壤微生物微生态的影响 采用温室隔离小区试验法，利用荧光显微镜和稀释涂平板的方法定量观察ANTI-8098A:pCM20对番茄根际土壤内所含的青枯病原菌、细菌、真菌以及放线菌的影响； 结合全自动微生物鉴定仪（美国MIDI系统），观察ANTI-8098A:pCM20对土壤内细菌、真菌和放线菌种类的影响； 结合ERIC-PCR技术分析ANTI-8098A:pCM20对根际细菌群体遗传多样化的影响。 三、研究内容与研究方法 ANTI-8098A:pCM20在番茄根际定殖机制对植株生长特性的影响 对番茄植株内生菌群的动态影响 温室隔离小区试验法，利用全自动微生物鉴定仪分析脂肪酸动态差异 对番茄植物生理特性的影响 苯丙氨酸解氨酶（PAL）、过氧化物酶（POD）、多酚氧化酶（PPO）及过氧化氢酶（CAT）活性的变化动态 对番茄植株生长的影响 组培苗试验、盆栽苗试验以及温室隔离小区试验，调查ANTI-8098A:pCM20对番茄长势、株高和苗重的影响 四、技术路线 五、拟解决的关键问题 建立基于全自动微生物鉴定系统（美国MIDI系统）和ERIC-PCR技术相结合的技术平台； 采用荧光显微镜、激光共聚焦电镜等观察其在番茄根际土壤的定殖规律，实现生防菌定殖的追踪分析； 阐明ANTI-8098A:pCM20的定殖机制以及对青枯病抑制机理。 六、可行性分析 六、可行性分析 主要内容 技术路线 4 研究背景 1 研究意义 2 研究内容与方法 3 拟解决的关键问题 5 可行性分析 6 病原 Ralstonia solanacearum 寄主 烟草、番茄、茄子等50多科的400多种植物。 分布 热带、亚热带地区；在我国，主要发生在长江以南地区。 青枯病防治方法 培育抗性品种 生物防治 化学农药防治 嫁接、水旱轮作 抗性易丢失 研究焦点 无特效 难推广 地域限制 生物防治 无致病力青枯菌 拮抗细菌 生态有机肥 大田推广 生防制剂作用体 系、方式不明确； 田间效果不稳定 生防机制 自然界中的生态分布 植物体表、体内的定 殖、扩展、分布规律 自然界中的生态分布 与病原菌以及 寄主之间的互作 土著微生物 传统检测方法复杂使用安全性限制 绿色荧光蛋白（Green fluorescent protein，GFP）是由水母合成的一种小分子量的蛋白质。 ANTI-8098A: pCM20 青枯病生防菌ANTI-8098A是番茄植株根际土壤分离获得的蜡状芽孢杆菌。 ANTI-8098A:pCM20在番茄根际土壤中定殖特性的研究 采用盆栽苗试验，观察不同接种时间、温湿度、接种方式等对ANTI-8098A:pCM20在番茄根际土壤定殖的影响，通过荧光显微镜和稀释涂布抗性平板，检测不同条件下番茄根际土壤内ANTI-8098A:pCM20的定殖条件和消长状态。 ANTI-8098A:pCM20在番茄根际土壤中空间分布特性的分析 采用温室隔离小区试验法，利用激光共聚焦显微镜，定性观察ANTI-8098A:pCM20在番茄根际土壤和根系组织定殖的空间分布 采用荧光显微镜和稀释涂抗性平板观察其在番茄根际土壤和根系定殖的数量变化，了解ANTI-8098A:PCM20在番茄根际土壤空间分布的特性。 ANTI-8098A转化 前后异质性的比较 温度的影响 定殖特性 ANTI-8098A:pCM20 稳定菌株的获得 ANTI-8098A:pCM20 定殖机制的研究 通气量的影响 pH值的影响 抑菌活性的比较 空间分布 微生态影响 对番茄生长的影响 ANTI-8098A已经成功用gfp基因进行标记 目前试验结果表明，AN