5301真空离心浓缩仪在测序实验室的应用.pdfVIP

实用技巧 No. 5 5301 真空离心浓缩仪在测序实验室的应用 Eppendorf 生产的 5301 真空离心浓缩仪有两个版本：作为配有抗腐蚀化学隔膜泵的完整系统的一部分或是作为一个便于升级 的基本配置，确保高效、平缓地对您的样品（如 DNA/RNA ，蛋白质）进行真空浓缩。对于许多提供商业化高通量测序服务的 实验室，由于必须浓缩处理大量低浓度 DNA 样品，是该款真空离心浓缩仪最佳的“用武之地”。也许有人会考虑通过应用不同 方法（如乙醇沉淀）反复浓缩以达到浓 缩核酸的目的，但是这种操作既耗时且 损失大量样品，无法保障精确测序的要 求而被此类实验室摈弃。另外，浓缩干 燥 DNA 样品也要把握适度原则，否则 样 品中湿度过低 ，DNA 不易重溶，一 样会影响后续实验的效果。 本文总结 了 5301 真空离心浓缩仪在测 序实验室的多方面应用，不仅展示出其 在浓缩核酸方面的独特优势，并且在去 除醇残留、分装酶、冻干样品及干燥大 量样品等方面均有上佳表现。 方法 2. 去除 DNA 样品中的醇残留 无法对重溶的 D NA 样品进行标准的测序反应，可能是由于 通常，测序反应所使用的都为 0.2 ml 的小管，为了使这些 DNA 样品中存在醇污染，通过 5301 真空离心浓缩仪加热 小管能更有效地插入 5301 真空离心浓缩仪专配的转子，我 60℃与“功能 1”命令，4 分钟内就可将 DNA 样品中的醇 们可以选用 Eppendorf 离心机用于 0.2 ml PCR 管相配的适 残留去除。 配器。 3. 分装酶 1. 再浓缩 DNA 样品 通过分别称量分装小量酶如 RNase 至微量检测管，想来就 许多时候，当完成循环测序通过聚丙烯酰胺凝胶分离后，却 是件费时费力的工作。为了在每个微量检测管中加入 1 mg 发现结果不尽如人意，我们首先需要考虑 DNA 样品是否浓 酶，先将 100 mg 酶溶入 1 ml 水中，在 Eppendorf 多道移 缩不足？除了通过比色分析浓度、通过将样品溶入少量溶剂 液器的帮助下在每个微量检测管中加入 10 μl 酶溶液，接下 浓缩样品外，推荐您使用 5301 真空离心浓缩仪再浓缩 DNA 来就是 5301 真空离心浓缩仪的强项，45℃与“功能 1”命 样品，通过加热 60℃与“功能 1”命令，仅需 30 分钟就可 令，5 分钟内就可将酶溶液中的水份完全蒸发。 将 150 μl DNA 水溶液浓缩至 10 μl ，而且不影响 DNA 之后 在测序中的反应。相同的参数条件也可用于测序中使用的引 物浓缩。 对于比较敏感的样品，我们不必机械地选择温度参数，可以 适当地选择相对低的温度，只要相应延长离心浓缩的时间即 可。 7 实用技巧 4. 干燥功能 5. 冻干样品 大家通常都有这种经验，大量质粒 DNA 的抽提、乙醇沉淀、 虽然不是专门设计的功能，5301 真空离心浓缩仪还可用于 离心、