肾系膜细胞自噬抑制、氧化损伤和衰老的影响.pdfVIP

2012;32(4) 南方医科大学学报（J South Med Univ ） ·467 · 基础研究 雷帕霉素对高糖诱导的肾系膜细胞自噬抑制、氧化损伤和衰老 的影响 李 锦，白雪源，崔少远，傅 博，陈香美 中国人民解放军总医院肾病科/ 肾脏疾病国家重点实验室，北京 100853 摘要：目的探讨雷帕霉素及3-甲基腺嘌呤（3-MA）对高糖诱导的原代大鼠系膜细胞自噬、氧化损伤及衰老的影响。方法从大 鼠肾分离培养原代肾小球系膜细胞（GMCs），分为正常对照组、高糖组、高糖+雷帕霉素（自噬增强剂）及高糖+3-甲基腺嘌呤（自 噬抑制剂）干预组。在细胞培养24 h、72 h 及10 d 时，Western blotting 观测自噬标志物- 自噬相关基因LC3及泛素结合蛋白p62/ SQSTMI 的表达变化；硫代巴比妥酸法检测细胞脂质损伤产物-丙二醛（MDA）水平，2,4-二硝基苯肼（DNPH）比色法测定细胞蛋 白质损伤产物-羰基含量，通过进行衰老相关β-半乳糖苷酶活性（SA-β-gal）染色及衰老相关异染色质斑块（SAHF）分析检测细胞 的衰老程度。结果与对照组相比，细胞经高糖处理72 h 和10 d 后，自噬标志物LC3 表达降低，p62/SQSTMI 升高，MDA 及羰基 含量上升（均P0.05）；处理72 h 细胞SA-β-gal 染色阳性率增加（P0.05），细胞核异染色质斑块形成增加。高糖培养的细胞用雷 帕霉素干预72 h 和10 d 后，LC3 表达升高，p62/SQSTMI 表达下降，MDA 及蛋白质羰基含量均下降（均P0.05），72 h 后细胞 SA-β-gal 染色阳性率下降（P0.05），细胞核异染色质斑块形成减少；高糖培养的细胞用3-MA 干预72 h 和10 d 后，LC3 表达下 降，p62/SQSTMI 表达升高，MDA 及蛋白质羰基含量升高（均P0.05），72 h 细胞SA-β-gal染色阳性率上升（P0.05），细胞核斑块 形成增多。结论高糖可抑制系膜细胞自噬功能，促进系膜细胞氧化损伤，加速细胞衰老；雷帕霉素干预可减轻高糖对系膜细胞 自噬功能抑制，减少氧化损伤，延缓衰老；3-MA加重高糖对系膜细胞自噬功能的抑制，进一步加重细胞氧化损伤，加速衰老。 关键词：系膜细胞；高糖；雷帕霉素；自噬；氧化损伤；衰老 中图分类号：R587.2; R691.6 文献标志码：A 文章编号：1673-4254（2012）04-0467-05 doi: 10.3969/j.issn. 1673-4254.2012.04.006 /kcms/detail/44.1627.R1635.002.html Effect of rapamycin on high glucose-induced autophagy impairment, oxidative stress and premature senescence in rat mesangial cells in vitro LI Jin, BAI Xueyuan, CUI Shaoyuan, FU Bo, CHEN Xiangmei Department of Nephrology, State Key Laboratory of Kidney Diseases, General Hospital of PLA, Beijing 100853, China Abstract: Objective To investigate the effects of rapamycin and 3-methyladenine on autophagy impairment, oxidative stress and premature senescence induced by high-glucose in primarily cultured rat mesangial cells. Methods Rat glomerular mesangial cells (GMCs) were isolated and cultured in normal glucose, high glucose, high glucose with 3-methy