利用基因扫描探究tcr rib 亚家族的cdr3 长度方法检测t 细胞克隆性.pdfVIP

维普资讯 一 0 ·48 · 1998年第 14 利用基因扫描分析 TCRrib亚家族的CDR3 长度方法检测T细胞克隆性 李扬秋 汪明春 (暨南大学血液病研究室，广州 510632) 吴幼华 汕头教育学院生化系，汕头515041) — — — 一 — 中国囝书分类号 R371．2R733-，·产 K ，7j z 摘 要 分析了建康人、T_AI，IJ外周血及T细胞抹Molt一4和Jurkat中TCRv0T细胞的表 一 达和克隆性。直用RT-PCR扩增TCRV母24个亚家族的cDR3，井经基田扫描和序列分析确定T 细胞克隆性 结果表明健康人表达除坤 20外的多克隆T细胞}T_ALL仅表达 3～4个V日亚家族 T细胞；部分星寡克隆性；Molt-4和Jurkat分别表达 和 lg单克隆 细船。T_ALL中存在克 隆性生长T细胞。该方法是检测T细胞克隆性的敏感和精确的方法。 关键词 TCRVB基因 覃 塞壁3(CDR3)基因扫描 T细胞克隆性 自血瘸 T细胞抗原受体(TCR)是 ．r细胞表面识别和 外，在 引物的左侧分别设一荧光素标记的c2- 结合抗原，参与特异性细胞免疫的重要分子 在T Fam引物tc FaIn5 am AcAGcGAIH G 细胞发育过程中，坯系的TCR各片段CV、D和J GTGC~ )和一生物素标记的c Bio引梅(C~-Bio 区)发生重排，重排时在v^D，D-J区之间可有不同 5一琢。_CACAGCGA~ AA)作为基 数量的核苷酸随机插入(N区)，形成具有高度多样 因 描和序列分析之阳 物『由锥画柏林TIB生 性 的可变化 区V~D0． 称为互补决定区 物公司合成。FCR操作按常规方法进行。总反应体 (CDR3) ，同一克隆的T细胞的TcRCDR3相同 积为 25 ，其中含 1 eDNA，0．1mmol／LdNTP 已报道人类TCR 基因有 24千亚家菔 (vol～ (dATP．d(_P，dGTP和dTTP)，引物浓度均为0．5 。4)0 鹌甩VB亚家族移C 硌鹋特蘸．采聃基西 }j倒 ／L(任一 l弓I物榔c辟弓l物)，．25UT8q聚 扫描分析是国外检测T细胞克隆性的新方法 合酶，所有试剂均为 rkiflElmer公司产 品，共进 行 40个循环： ℃，1min(首次 gmin)；60C，1 1 材料与方法 n}72℃．1血n(束次 10，rain)；结束后保存于4C 11 标本 中 各反应均设阳性和阴性对照，产物于2．5 琼脂 经细胞形态学、细胞纽化和细胞免疫学确诊的 糖中电溶分析 一 T细胞白血病患者 (T_ALL)2例，T细胞抹Molt一4 1．2．3 T细胞克隆性分析(cDR3长度分析) 及Jur~t和正常人8例。 1．工3．1 标记PCR产物 (Run~)iitea 口 1．2 方法 RT-PCR产物经琼脂糖凝腔电泳分析簏现阳性 1． 1 外周血单个核细胞分离、RNA提取及反转 带者进一步经引物C~Fem避行不对纷P( 扩增， 录台成cDNA ， 以榻到荧光素标记的单链PcR产物．总反应体积为 均按常规方法进行。 10一，含2．首挺P