植物酶抑制技术用于检测蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留.pdfVIP

维普资讯 第 2I眷 第 2期 环 境 化 学 Vol 21． No．2 2{x)2 年 3IEj E IRONMENrAL CHEMIs1 Y March 200口 植物酶抑制技术用于检测蔬菜 中有机磷 及氨基 甲酸酯类农药残留 钟树 明 袁 东星 金晓英 许鹏翔 厦 J大学环境科学研 究 中 0，海洋环境科 学教育部重 点 验室 ．厦 门 摘 要 应坩植物酶抑制挂术l检测蔬菜 中的有机磷 烛氰基 甲酸酯类农 药．用小柱对样 品 进行预处理 呵去陈叶绿索的 下扰 提高检测 灵敏度 提出了抑铜 率闻值 (15％)． 应 片}车 ^洼对市售蔬 纂的农药残 留进r仃 r两者 ，检出率约为 10％ 关键词 ：蔬菜 有机磷农药 ，氰基 甲酸酯类农药 ，植物酶 ，抑制率 利用有机磷农药埘 乙酰胆碱酯酶 的特异抑制作用发展 的酶化学 比色分析法 ，已广泛 应用 于痕盛和微量有机磷及 氧基 甲酸酯类农 药残 留的检测 I， +但 是乙酰胆碱 酯酶来源 于动物体 ．材料 昂贵 ，且保存 困难 ，近年来发展 了用植物水解酶替代 乙酰胆碱酯酶 的分 析方法 ，该法利用植物水解酶水解 2，6．二氯乙酰靛酚+根据反应溶液在水解前后颜色 的变化 ，用 眼睛或仪器辨别农药对酶 的抑制程度 ．在有机磷或氨基 甲酸酯类农药存 在 时 ，植物水解酶 的活性受到抑制 ，靛酚的蓝色变浅 ． 率研究采用小柱净化 ，能有效去除萃取液 中的叶绿素 ；应用植物酶抑制技术检测蔬 菜 中的有机磷及氯基 甲酸酯类农药 ；并根据有关标准提出了抑制率 阊值 ． 1 仪器和试 剂 BECK．~,IANDU．8B紫外．可见分光光度计 ，带恒温装置 (美 国产)，XK95．i型多用振 荡器 (江苏新康仪器厂)，I134．2离心机 (北京医用离心机厂)． 2．6．_I氯乙酰靛酚指示剂_4J：取 0．1ntol干燥 的2，6．二氯靛酚钠盐 (德国产 ，上海试 剂有 限公司进 口分装)于锥形瓶中，加入 0．3otol的乙酸酐 ，在振荡器 中振荡 2h．在室 温 下静置 jh后加入 600g碎冰块 +l5h后过滤 ，滤 出物用水洗后溶于 乙醚 中，加无水硫 酸钠干燥 ，在水浴上蒸发至约 10nd，然后加入 4倍体积 的石油醚稀释或加石油醚直到 出 现结 晶为止．过滤 ，滤液冰冻冷却后得晶体 ，再用乙醚／石油醚重结 晶一一次 ．真空干燥 ． 晶体避光保存 称取所得 晶体 lOmg，溶于 10ml1．4．二氧六环 (分析纯 ，上海试剂三厂) 中． 得 10rag·ml 的2，6-二氯 乙酰靛酚指示剂 ，避光保存 ． 磷酸盐缓冲液 (0．1mol·j )：混合 94．7nd0．1mol·l 磷 酸 氢 ：=钠溶 液 和 5．3nd 0 1mo]，l磷酸二氢钠溶液 ，得 DH值为 80的磷酸盐缓冲液 ． 而粉酶溶液0 ：称取 5g市售面粉 于锥形瓶中，加入 加ml蒸馏水 ，在振荡器上振荡 30nfin，以2(3(~3000r·min 在离心机上离心 lOmin，上清液用针筒式过滤器过滤 +得面 维普资讯 190 环 境 化 学 21卷 粉 酶溶液 ，置于 4℃冰箱 中保存 50％甲胺磷乳油 (福建省三农公司1．50％辛硫磷乳油 (江苏省城市利 民化工厂)， 增效 甲基异柳磷乳油 (青岛双收农药公司)，80％敌敌畏乳油 (江苏梅兰公司)，氧化乐 果乳油 (中国人民解放军第 九七 一五工厂)，17．5％增效水胺硫磷乳油 (湖北省仙桃市 农药』)，40％乐果乳油 (沈阳新城化工公司)，敌百虫原粉 (南宁化学工业集团)，3％ 呋喃丹粒剂 (南宁化学工业集 团) 2 样 品预 处理