MSRDA的改进及在白背飞虱的应用研究.pdfVIP

第５２卷　第５ 期 中山大学学报 （自然科学版） Ｖｏｌ５２　Ｎｏ５ 　 ２０１３年　９ 月 ＡＣＴＡ　ＳＣＩＥＮＴＩＡＲＵＭ　ＮＡＴＵＲＡＬＩＵＭ　ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＡＴＩＳ　ＳＵＮＹＡＴＳＥＮＩ Ｓｅｐ　２０１３ 　 ＭＳＲＤＡ 的改进及在白背飞虱的应用研究 周晓穗，陈佳林，张　梅，王方海 （中山大学有害生物控制与资源利用国家重点实验室 昆虫学研究所，广东广州５１０２７５） ∥ 摘　要：甲基化敏感性代表性差异分析方法 （ＭＳＲＤＡ）适用于特异、低丰度基因组 ＤＮＡ 甲基化的筛查与鉴 定，已大量应用于哺乳动物的疾病发生和植物发育机理方面的研究，但昆虫中尚未发现该方法的应用。从 ＤＮＡ 提取、酶切、扩增子制备、消减杂交等方面对该方法进行了改进，并在水稻重要害虫白背飞虱上得到成功应用， 获得了４条与雌、雄性别相关联的特异性甲基化差异条带，其中有３ 条序列已被 ＧｅｎＢａｎｋ 收录，登陆号分别为 ＪＸ８４７６２１、ＪＸ６２４１６１、ＪＸ４７２４５３，经ＢＬＡＳＴ 比对，有３条未发现同源性序列，属于功能未知的新基因；同时还 获得了２条与长短翅型相关联的特异性甲基化差异条带，也已被 ＧｅｎＢａｎｋ 收录，登陆号分别为 ＪＸ５１４０３１、 ＪＸ４７２４５４，同源性分析发现与多种动物的１８Ｓ核糖体和２８Ｓ核糖体ＲＮＡ基因序列高度相似，因此有关核糖体基 因的甲基化可能对白背飞虱的翅型分化起到一定的调控作用。 关键词：ＭＳＲＤＡ；ＤＮＡ 甲基化；白背飞虱；翅二型 中图分类号：Ｑ９６５　　文献标志码：Ａ　　文章编号：０５２９ －６５７９ （２０１３）０５ －０１１８－０５ Ｔｈｅ Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ ｏｆＭＳＲＤＡ ａｎｄ Ｉｔｓ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｉｎ Ｓｏｇａｔｅｌｌａｆｕｒｃｉｆｅｒａ （Ｈｏｒｖａｔｈ） ＺＨＯＵＸｉａｏｓｕｉ，ＣＨＥＮＪｉａｌｉｎ，ＺＨＡＮＧＭｅｉ，ＷＡＮＧＦａｎｇｈａｉ （Ｓｔａｔｅ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｆｏｒ Ｂｉｏｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆＥｎｔｏｍｏｌｏｇｙ，Ｓｕｎ Ｙａｔｓｅｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０２７５，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎａｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ （ＭＳＲＤＡ）ｉｓ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆｏｒ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｄ ｌｏｗ ａｂｕｎｄａｎｃｅｓｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ．Ｉｔｈａｓｂｅｅｎ ａｐｐｌｉｅｄ ｉｎ ｍａｎｙ ｒｅｓｅａｒｃｈｅｓ ｏｎ ｍａｍｍａｌ ｄｉｓｅａｓｅ ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ ａｎｄ ｐｌａｎｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ，ｂｕｔ ｎｏ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｗａｓ ｒｅｐｏｒｔｅｄ ｉｎ ｉｎｓｅｃｔｓ．Ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ，ｗｅ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ａ ＭＳＲＤＡ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｉｎｓｅｃｔｓ，ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｆｒｏｍ ＤＮＡ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ ｅｎｚｙｍｅ ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ，ａｍｐｌｉｃｏｎ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ，ａｎｄ ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ． Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓｆｕｒｔｈｅｒ ａｐｐｌｉｅｄ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ ｉｎ Ｓｏｇａｔｅｌｌａｆｕｒｃｉｆｅｒａ （Ｈｏｒｖａｔｈ），ａｎ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｒｉｃｅ ｐｅｓｔ ｉｎ Ｃｈｉｎａ．Ｆｏｕｒ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ ＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈ ｆｅｍａｌｅ ａｎｄ ｍａｌｅ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ．Ｔｈｒｅｅ