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浙江理工大学学报，第30卷，第6期，2013年儿月
Journalof Sci—Tech
Zhejiang University
V01．30，No．6，Nov．2013
文章编号：1673—3851(2013)06—0877—04
乳腺癌耐药蛋白BCRP高表达细胞株的构建
应帅。郑婷婷，陈培远，许传莲
(浙江理工大学生命科学学院，杭州310018)
摘要：脚属于ABC转运蛋白超家族G亚族的第二位成员，是导致临床乳腺癌治疗失败的最主要原因之
一。通过构建pLJMl一沈rp重组质粒，利用病毒侵染的方法，将重组质粒转染至乳腺癌细胞株McF-7中，通过嘌呤
mRNA水平和蛋白质水平研究BCRP的表达。
关键词：BCRP／ABCG2；重组表达载体；病毒侵染
中图分类号：Q786 文献标志码：A
表明BCRP在干细胞中广泛表达，可作为多种肿瘤
0 引 言
干细胞的标记物[7_8]。
BCRP(breastcancerresistance 本文采用病毒侵染的方法拟构建BCI心高表达
protein)属于
ABC转运蛋白超家族G亚族的第二位成员，能够利
用ATP水解提供的能量将化学治疗药物排出细胞 P(R方法分别从蛋白质水平以及基因水平进行验证。
resistance，筛选BCI冲高表达细胞株可为后续研究BCI心的外
外，是造成癌细胞耐药性(multidrug
MDR)的主要原因L1J。 排功能以及筛选逆转耐药性药物提供了细胞模型。
BCRP基因位于染色体4q22，全长66kb，由16
1 实验材料与方法
个外显子和1s个内含子组成，编码655个氨基酸，
1．1材料与试剂
蛋白大小为72kDa。BCRP仅由一个ATP结合结
构域和一个由6个Ⅱ螺旋结构的横跨膜结构域组 BCRP
州复能基因有限公司；BCRP单克隆抗体购自Epit—
成，与其他的全转运蛋白如P—gp或MRPl(含两个
mics公司；DNA限制性内切酶N^PI和Ef0RI购
或两个以上的MSD和NBD结构)相比，BCRP可定
自Takara公司；反转录试剂盒购自上海莱枫生物科
义为半转运蛋白[2]。BCRP最早发现于阿霉素抗性
技有限公司。慢病毒质粒pLJMl及其两个包装质
的乳腺癌细胞株MCF_7／AdrVP[31中。随后，Miy—
3、MCF一
ake 粒(PsPA2、PMD2．G)、大肠杆菌菌株Stbl
k、AllikmetsR等相继从米托蒽醌抗性的直肠
7细胞、293T细胞为本实验室保存。
癌细胞株(名为MXR)[4]和人类胎盘组织(命名为
ABCP)[I]中克隆得到类似基因。 1．2载体构建
7一衄、op
BCRP主要分布在具有分泌和排泄功能的组织 以BCRP的cDNA为模板，6fr矿A(5
中。BCRP作为一种高效的外排泵在对药物等外源
性物质在体内的吸收、分布、排泄过程发挥着重要作
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