草鱼呼肠孤病毒湖州分离株的分离及鉴定.pdfVIP

第 32卷 第 l期 渔 业 科 学 进 展 Vo1．32，NO．1 2 O l 1 年 2月 PROGRESS IN FISHERY SCIENCES Feb．。2O11 草鱼呼肠孤病毒湖州分离株 的分离及鉴定 郝贵杰 沈锦玉 潘晓艺 徐 洋 姚嘉赞 尹文林 (浙江省淡水水产研究所 ，湖州 313001) 摘 要 2008年 6月从湖州某患病草鱼池塘采集草鱼 出血病疑似病样，将除菌过滤后 的患病鱼 肝 、脾、肾组织滤液，注射健康的8～10cm 的草鱼鱼种 。5d后草鱼开始发病 ，且症状与原发病症状一 样 ，死亡率为57 ，对照组未有死亡。将无菌处理的病样滤液接种草鱼 肾细胞 (CIK)，连续接 5代均 出现明显的细胞病 雯(CPE)，并与草鱼呼肠孤病毒参考株所产生的 CPE一致 。该株病毒的 TCIDso 为 lO ／0．1m1。内脏组织经超薄切片，电子显微镜观察 ，发现组织内有大量的病毒颗粒，大小均一， 近似球形，直径约7o～75nm。理化鉴定表明，氯仿、乙醚处理组病毒的感染力和对照组相比并没有 多大变化，说明该株病毒对氯仿和 乙醚有一定的抗性。经草鱼呼肠孤病毒特异性的 RTPCR检测 ， 获得阳性的 目的片段 ，测序的结果与草鱼呼肠孤病毒相应序列的同源性达 99％以上。上述鉴定结果 表 明所分离的病毒为草鱼呼肠孤病毒 ，将其命名为HZ2008。 关键词 草鱼 草鱼呼肠孤病毒 草鱼肾细胞 分离 鉴定 中图分类号 文献识别码 A 文章编号 1000—7075(2011)01—004706 Isolationandidentificationofastrain ofGrasscarp reovirusinHuzhou HAOGui—jie SHEN Jin—yu PAN Xiao—yi XU Yang YAO Jia——yun YIN W en—-lin (ZhejiangInstituteofFreshwaterFisheries，Huzhou，313001) ABSTRACT Aquareoviruses，whichbelongtoanewlyidentifiedgenusofthefamilyReovi rdae，areagentsinfectingallkindsofaquaticanimals．Grasscarpreovirus(GCRV)isakindof Dathogenicviruswhich causesdiseaseoutbreakofGrasscarpfingerlingin freshwaterregion of China．InJune2008，astrainvirushadbeenisolatedfrom thesamplesofvisceralorgansofthe diseasedGrasscarPwithHemorrhagesymptomsfrom afishpondatHuzhouCityinZhejiang Province．Sampleofdiseased Grasscarp visceralorganswasfiltered and was lnjected into heahhyGrasscarpfingerlings．Clinica1signsofHemorrhagesymptomsO{GrassCarpwererep— licatedafterfivedavs．M ortalityofthesamplewas57 ．Bycontrast，thecontrolgroupfishes werestillalive．ThesamplewascontinuallyinoculatedontoCIK cellsandinducedtypicalcyto— Dathiceffect(CPE)wasobserved．ThetypicalCPE wasthesamewith thatinduced bythe GCRV873strain．TheTCID