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ND在蛋白检测中应用专题三 ——蛋白定量方法的选择受缓冲液的影响 前言 常用的蛋白定量方法有直接测280nm 吸光值法、比色法和荧光法。选择哪种定量方法取决于多 种因素，其中蛋白大概的浓度和蛋白是否经过纯化是需要考虑的因素。另一个常被忽视的因素 是溶解蛋白所用的缓冲液，这个因素也应该被考虑到。 本研究检测了多种常用蛋白缓冲液的光谱图，尤其是它们在280nm 的光吸收。通过用纯的去离 子水做blank，即可直接测出缓冲液的光谱图。280nm 的吸光值可以帮助我们判断此种缓冲液是 否适合用A280 法检测蛋白浓度。 本研究还考察了A280 的方法检测溶解在 RIPA 缓冲液（裂解液）中蛋白的浓度这种方法的准确 性。这种缓冲液在UV 区有较大的光吸收，是典型的不适合用A280 方法。同时通过直接测A280 和BCA 比色法检测溶解在PBS 或RIPA 缓冲液中的牛血清白蛋白的浓度，以评估错误的缓冲液对 检测结果的影响。 材料和方法 我们用水做blank 后测定工作浓度的PBS、M-PER、T-PER、HEPES 和RIPA，得到这些常用缓冲液 的光谱图同时也检测了Triton X-100，CHAPS 和NDSB-201 三种蛋白缓冲液中常含的成分。 将2mg/mL 的BSA母液（Thermo Scientific Pierce Pro