真核载体pcDNA31PSD95PDZ2的构建、表达及功能鉴定.pdfVIP

安徽医科大学学报摇 粤糟贼葬 哉灶蚤增藻则泽蚤贼葬贼蚤泽 酝藻凿蚤糟蚤灶葬造蚤泽粤灶澡怎蚤摇 圆园员圆 阅藻糟；源苑 员圆） ·员猿苑苑 · ◇基础医学研究◇ 真核载体 责糟阅晕粤猿郾员辕 孕杂阅怨缘鄄孕阅在圆 的构建、表达及功能鉴定 朱明媚 摘要摇 目的摇 构建含突触后密度蛋白鄄怨缘（孕杂阅怨缘）的第圆个 孕阅在圆，检测其表达和功能，为今后研究其脑保护作 盘状同源区域（孕阅在圆）的真核载体责糟阅晕粤猿郾员辕 孕杂阅怨缘鄄孕阅在圆 用奠定基础。 并检测其在鼠嗜铬细胞瘤细胞株（孕悦员圆）中的表达和功能。 方法摇 采用砸栽鄄孕悦砸法从小鼠神经元细胞的糟阅晕粤 中，扩增 员摇 材料与方法 出约猿园怨 遭责 的孕杂阅怨缘鄄孕阅在圆 基因片段。用 耘糟燥砸 、月葬皂匀 陨 Ⅰ 员援员摇 实验动物摇 昆明种孕小鼠员只，清洁级 缘愿 早 将片段和载体 责糟阅晕粤猿郾员双酶切后，酶切产物加入栽 阅晕粤 孕期员 耀员愿 凿，由南京医科大学实验动物中心提供。 连接酶 员远益 连接过夜，构建真核表达载体 责糟阅晕粤猿郾员辕 孕杂阅怨缘鄄孕阅在圆。用双酶切、阅晕粤序列分析鉴定正确后，采用阳 员援圆摇 主要试剂摇 质粒责糟阅晕粤猿郾员 由江苏省中医药 离子脂质体 栽酝 研究院提供；阅晕粤质粒提取试剂盒、阅晕粤凝胶回收 蕴蚤责燥枣藻糟贼葬皂蚤灶藻 圆园园园将其转染孕悦员圆 细胞 陨孕法 检测目的片段在细胞中的表达与功能。结果摇 阳性克隆经 试剂盒购自美国 粤曾赠早藻灶 公司；限制性核酸内切酶 耘糟燥砸 、月葬皂匀 栽 阅晕粤连接酶购自美国晕耘月公 双酶切法鉴定含有孕杂阅怨缘鄄孕阅在圆基因片段，基因测序结果与 Ⅰ Ⅰ 郧藻灶月葬灶噪 中序列相同。陨孕检测出 员员 噪怎大小的蛋白，证明目 司； 圆伊孕悦砸酝葬泽贼藻则酝蚤曾、阅晕粤 酝葬则噪藻则购自北京天根生 的基因在孕悦员圆 细胞中可以正常表达并与神经元性一氧化 化科技有限公司；神经基础培养基、阅酝耘酝、云员圆、月圆苑 氮合酶（灶晕韵杂）结合。结论摇 真核载体 责糟阅晕粤猿郾员辕 孕杂阅怨缘鄄 购自美国 郧蚤遭糟燥 公司；脂质体转染试剂盒 蕴蚤责燥鄄 孕阅在圆构建成功，目的片段孕杂阅怨缘鄄孕阅在圆在孕悦员圆 细胞中可正 枣藻糟贼葬皂蚤灶藻栽酝 圆园园园 购自美国 陨灶增蚤贼则燥早藻灶 公司；所用抗 常表达并与灶晕韵杂结合，为进一步研究其作用奠定了基础。 体均购自美国 杂葬灶贼葬 悦则怎扎公司；其他试剂均为国产 关键词摇 孕杂阅怨缘鄄孕阅在圆；真核表达载体；构建；表达 分析纯。 中图分类号摇 匝苑愿 员援猿摇 方法 文献标志码 粤 文章编号 员园园园原员 怨圆（圆园员圆）员圆原员猿苑苑原园 员援猿援员摇 引物设计摇 根据 郧藻灶月葬灶噪 中小鼠孕杂阅怨缘 摇 摇 缺血性脑血管疾病是神经系统的常见病和多发 （晕酝赃园园苑愿远 ）的孕阅在圆 结构域设计一对引物，目的 病，大部分患者遗留了不同程度的认知障碍，给社会 基因长度为猿园怨 遭责。根据真核载体责糟阅晕粤猿郾员上的 ［员］ ［圆］ 多克隆位点，上、下游引物的缘忆端分别引入酶切位 和家庭带来了沉重的负担 。研究 表明，脑缺血 点耘糟燥砸 、月葬皂匀 陨，上游引物添加运燥扎葬噪 序列。 时，神经元持续性去极化，会过度激活晕鄄甲基鄄阅鄄天