淡水蓝藻产生神经毒素BMAA和DAB的潜力及其环境影响因子研究.pdfVIP

谨以此论文献给所有帮助和关心我的人们 樊华 淡水蓝藻产生神经毒素BMAA和DAB的潜力及其环境影响因子 研究 摘要 β-N- 甲氨基-L-丙氨酸（BMAA ）是一种非蛋白氨基酸，具有毒害运动神经元 的毒性，被认为是诱发肌萎缩侧索硬化— 帕金森痴呆综合症 （ALS-PDC ）等神 经退行性疾病的重要环境因子。2,4-二氨基丁酸（DAB ）作为BMAA 的同分异构 体，能够毒害生物的肝脏和神经系统。近年来，我国淡水环境中频繁暴发蓝藻水 华，严重污染了河流、湖泊、水库等饮用水资源，潜在威胁人们的身体健康和饮 用水安全。蓝藻水华与逐年攀升的老年痴呆症发病率之间是否具有因果关系，是 关系我国居民健康的重要科学命题。 本论文采用亲水交互作用色谱柱建立了LC-MS/MS多反应监测模式（MRM ） 分析神经毒素BMAA和DAB 的方法；比较了Oasis-MCX和Strata-X-C聚合阳离子 交换柱纯化蓝藻样品的性能，并对其基质效应进行了评估；通过改变氮、磷营养 盐浓度、温度及光照强度等培养条件，首次分析了两株铜绿微囊藻和一株念珠藻 在不同环境条件下的产毒水平；并对实验室内常规条件下培养的19株蓝藻、采自 我国太湖、巢湖、洪泽湖的浮游植物以及螺旋藻、紫菜等藻类制品进行了分析， 为客观评价我国淡水环境中BMAA和DAB 的生态风险及食品安全提供科学依据。 比较两种阳离子交换固相萃取柱纯化蓝藻样品的效果，结果表明：应用 Strata-X-C纯化样品，在DAB峰的后面出现一个未知组分的小色谱峰，流经该萃 取柱的毒素混合标准和蓝藻提取物加标样品中BMAA和DAB 的回收率分别为 69.3%~87.4%、72.5%~82.1% ；Oasis-MCX 固相萃取柱分离纯化蓝藻样品提取物 时BMAA和DAB 的回收率比同等条件下应用Strata-X-C 固相萃取柱的回收率高， 且没有共洗脱峰出现，因此，选用Oasis-MCX 固相萃取柱纯化蓝藻样品。 LC-MS/MS分析蓝藻样品的过程中，赖氨酸、组氨酸、精氨酸等碱性氨基酸化合 物对DAB信号强度产生一定的抑制效应，但不影响BMAA 的信号强度。该方法分 析BMAA和DAB 的灵敏度较高，检出限（S/N=3 ）在10 pg以内。 对于分离自我国淡水水体的近20株蓝藻样品、野外采集的浮游植物样品以及 藻类制品等样品中的BMAA和DAB含量进行了分析，结果表明：所分析的变动条 件培养的蓝藻、野外采集的浮游植物样品、市售螺旋藻、紫菜以及鱼翅样品中均 未检出BMAA ，但普遍存在少量的游离态DAB ，且蓝藻样品中DAB 的含量受光 照强度、氮磷比例等环境因子的影响。蓝藻DAB含量在较高（9000 lx ）或较低 （1000 lx ）的光照条件下偏高，说明极端的光照强度提高了蓝藻产生DAB 的能 力，温度影响蓝藻产生DAB能力的趋势与光照强度相似；随着培养基中磷酸盐浓 度的增加，蓝藻产生DAB 的能力增强，但在不同浓度的硝酸盐培养条件下却出现 了截然相反的趋势，“氮限制”的状态会刺激DAB产生，综合考虑两种营养盐的 影响，环境中较低的氮磷营养盐浓度比 （N/P ）有利于蓝藻产生神经毒素DAB 。 神经毒素DAB 的普遍检出应引起高度重视，及时建立标准化的检测方法和水 环境安全限值，保障人类健康、饮用水以及食品安全。目前，有关DAB 的慢性毒 性作用、致毒机制、环境行为的认识还非常有限，亟需在将来的工作中深入研究。 关键词：蓝藻；神经毒素；β-N-甲氨基-L-丙氨酸（BMAA）；2,4-二氨基丁酸（DAB）； LC-MS/MS Potential production of neurotoxins BMAA and DAB in freshwater cyanobacteria and effects of environmental factors Abstract It has been suggested that the non-protein amino acid, β-N-methylamino- L-alanine (BMAA), is an important path