分光光度法测定微生物发酵液中d-核糖浓度及其原理.pdfVIP

( ) 第 30 卷 分析化学 FENXI HUAXUE 　研究简报 第 8 期 　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　 2002 年 8 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 975～977 分光光度法测定微生物发酵液中 D核糖浓度及其机理 彭彦峰　吴兆亮 　李英杰 (河北工业大学生物工程系 , 天津 300130) 摘 　要 　研究了发酵液中 D核糖的分光光度测定方法。根据分光光度法测定 D核糖的原理 ,研究了发酵液 中 D核糖的测定影响因素和规律。得出最佳的测定波长为 670 nm 、加热时间为 25 min 、氢离子浓度为 8 mol/ L 、D核糖浓度在 10～30 mg/ L 范围内吸光度 A 与D核糖浓度有线性关系 ,发酵液中的非葡萄糖成分的影 响可忽略。葡萄糖对 D核糖的测定影响显著 ,通过实验得出其变化规律。建立了分光光度法测定微生物发 酵液中 D核糖浓度测定的有效方法。 关键词 　D核糖 , 分光光度法 , 发酵液 1 　引　　言 D核糖是组成生物体内遗传物质核糖核酸的重要成分 ,也是一些辅酶和维生素的重要成分 ,在食 品和医药等领域有广泛的用途1 ,2 。特别是由 D核糖为原料通过半合成生产维生素 B2 是目前世界上 采用的最先进的方法 ,近年来由 D核糖为原料研制出的抗癌和抗病毒新药也显示出很好的应用前景。 D核糖的生产方法有 3 种 :水解核酸法、化学合成法和微生物发酵法1 。其中微生物发酵法因副 产物少、生产成本低和产率高而引起国内外更多研究者的关注 ,特别是菌种选育有较大的进展1 ,3 ～5 。 为了深入研究微生物发酵法生产 D核糖代谢控制 ,进一步提高 D核糖合成速率 ,其中重要的一个环节 是准确和快速测定发酵液中的 D核糖浓度。 D核糖测定方法有很多 ,但由于分光光度法具有快速和简便等优点而被广泛使用。目前的测定方 法是针对纯 D核糖溶液的测定 ,没有考虑溶液中的其它组分特别是葡萄糖的影响6 。本文在阐述分光 光度法测定 D核糖机理的基础上 ,深入研究发酵液中 D核糖测定的影响因素和规律 ,提出分光光度法 测定发酵液中 D核糖的方法。 2 　实验部分 2 . 1 　实验原理 酸性和加热条件下 ,D核糖脱水生成糠醛7 ,糠醛与苔黑酚发生缩合反应 , 同时与 Fe3 + 生成有色的 配合物 ,此有色配合物随 D核糖浓度增大其颜色加深 , 因此可用分光光度法进行定量测定。葡萄糖为 五羟基醛糖 ,可在酸性条件下脱水生成羟甲基糠醛7 ,也有类似 D核糖的反应。 2 . 2 　试剂和仪器 ( ) ( ) D核糖 Sigma 公司 ,苔黑酚 Farco 公司 。其它药品均为国产分析纯试剂。 ( ) ( ) SBA50A 酶电极分析仪 山东省科学院生物研究所 ;756 紫外分光光度计 上海第三分析仪器厂 ; ( ) 752 紫外分光光度计 上海第三分析仪器厂 。 3 　结果与讨论 3 . 1 　测定波长的确定 对 D核糖浓度为 25 mg/ L 待测液和蒸馏水为参比液 ,进行连续波长扫描 ,加热时间 25 min ,氢离子 浓度为 8 mol/ L 。其吸光度A 随波长的变化规律见图 1 ,结果表明有两个峰值 ,在 400 nm 为抖动波峰 ,且 参比液 A