DNA甲基化抑制鼻咽癌细胞系膜联蛋白A1基因表达.pdfVIP

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2009, 36(10): 1319~ 1326 DNA 基化抑制鼻咽癌细胞系 膜联蛋白 基因表达* A1 1, 2) 1)** 1) 2) 2) 谭双香 胡瑞成 戴爱国 汤参娥 易 红 2) 2) 2) 2)** 程爱兰 陈主初 李建玲 肖志强 1) 2) ( 湖南省老年医院- 湖南省老年医学研究所，长沙4 10016； 中南大学湘雅医院卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室，长沙4 10008) 摘要 为了研究不同分化程度和转移潜能鼻咽癌(NPC)细胞系膜联蛋白A 1(ANXA 1)mRNA 和蛋白质表达情况及其与基因甲 基化的关系 培养NPC 细胞系CNE1 、CNE2、5-8F、6-10B 和永生化非癌性人鼻咽黏膜上皮细胞NP69 细胞用于实验，用甲 基化特异性聚合酶链反应(MSP)方法检测ANXA1 基因甲基化状态，同时利用逆转录- 聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测 ANXA1 基因的mRNA 表达水平 然后用不同浓度的5- 杂氮-2 - 脱氧胞苷(5-aza-2dC)对NPC 细胞进行去甲基化处理，MSP 和RT-PCR 方法检测处理组和对照组细胞ANXA1 基因甲基化状况和mRNA 表达水平，并用Western-blotting 方法检测 ANXA1 基因蛋白质表达水平 结果发现，NP69 细胞ANXA1 基因无甲基化，4 株NPC 细胞系ANXA1 基因都存在不同程度 的甲基化，甲基化程度与细胞的分化程度和转移潜能相关 NPC 细胞ANXA1 基因mRNA 表达 平降低，低于NP69 细胞， 其降低的程度与基因的甲基化程度相关 5-aza-2dC 能够剂量依赖性地引起ANXA1 基因去甲基化，经去甲基化处理后， NPC 细胞系ANXA1 基因的mRNA 和蛋白质的表达 平相应提高 研究证明，NPC 细胞系ANXA1 基因的mRNA 和蛋白质 表达水平出现下调，甲基化是导致表达下调的主要原因，5-aza-2dC 去甲基化处理能够恢复ANXA1 基因的表达水平 关键词 鼻咽肿瘤，甲基化，表观遗传，膜联蛋白A1 ，脱氧胞苷 学科分类号 Q5 ，R73 ，R76 DOI: 10.3724/SP.J.1206.2009.00 170 鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma ，NPC) 高发 度、进展、转移、预后相关，是一种新的肿瘤抑制 于 国华南地区和东南亚地区，具有显著性的种族 蛋白，也是一种具有重要潜在价值的肿瘤生物学标 [1] [4～6, 10, 11] 分布特点和地域分布特点 虽然历经大半个世纪 志物 的研究，NPC 的发病机制目前仍未完全阐明，一 ANXA1 基因的表达调节机制尚有待于进一步 般认为NPC 发病与遗传因素、病毒感染和环境等 深入研究，其在肿瘤中mRNA 和蛋白质表达水平 因素有关 近年，越来越多的研究证实基因甲基化 同时出现降低[4, 12, 13 ] ，提示表达调节主要发生在基 参与了NPC 的发生发展过程，目前报道的NPC 甲 因水平或转录水平 有研究发现B 细