细胞水平筛选鉴定激活核因子κB通路的新基因TMEM9B.pdfVIP

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2009, 36(11): 1423~ 1428 胞水平筛选鉴定激活核因子 通路的 B 新基因TMEM9B* 1,3)** 1)** 1) 1,2)*** 1,2) 宇明 彭 智 邓唯唯 石太平 马大龙 1) 2) ( 国家人类基因组北方研究中心，北京100176 ；北京大学医学部基础医学院医学免疫学实验室，北京 100 191； 3) 内蒙古工业大学化工学院，呼和浩特0 1005 1) 摘要 核因子 B(NF- B)是细胞内重要的转录因子，其介导的细胞信号转导通路在细胞凋亡中的作用是 内外研究的热点 为了筛选NF- B 通路相关新基因，建立了基于细胞水平的报告基因高通量筛选模型 利用双荧光素酶报告系统检测报告基 因荧光素酶活性，通过对构建的439 个人类 知功能基因的筛选，获得了一批激活NF- B 信号通路的功能基因，其中基因 TMEM9B 可以明显激活NF- B 通路 进一步实验显示TMEM9B 激活NF- B 通路呈明显剂量依赖性，Western blot 及EMSA 实验证实，TMEM9B 能够促进胞质内NF- B 的抑制分子I B琢 的降解，并促使NF- B 由胞质向胞核转移，同时流式细胞术 实验发现TMEM9B 可引起293T 和HeLa 细胞的凋亡 总之，所建立的基于细胞水平的NF- B 通路筛选模型稳定高效，筛 选并验证TMEM9B 可明显激活NF- B 信号转导通路，并从而引起细胞凋亡 关键词 细胞水平筛选，TMEM9B，核因子 B(NF- B)，细胞凋亡 学科分类号 R3 ，R392 DOI: 10.3724/SP.J.1206.2009.00256 随着人类基因组测序工作的完成，大量未知功 IAPs ，Bcl-2，Bcl-xL，c-myc 的转录调控，具有抑 能的基因被发现，基于细胞水平的功能基因高通量 制细胞凋亡的作用[5] 而随着NF- B 抑制细胞凋亡 [1] 筛选技术迅速形成和发展 ，已广泛应用于人类功 机制研究的不断深入，人们发现，NF- B 在不同的 能基因组研究，可以高效获得大量基因的功能线 刺激因素及特定的细胞类型中还有促进细胞凋亡的 索，发现一批具有重要生理意义的新基因，为各种 作用，促凋亡的机制是NF- B 通过促进凋亡相关 生理病理机制的深入研究提供了条件，也为疾病治 基因如Fas ，FasL 的表达而使细胞发生凋亡[6～9] 疗靶标的发现和基因药物的开发打下了基础 NF- B 的异常活化与很多疾病的发生有关，如自身 NF- B/Rel 蛋白是细胞内最重要的转录因子之 免疫病、炎症反应、肿瘤等[10～12] 这也就使得对 一 静息状态下，核因子 B(NF-