破色期番茄果实均一化cDNA沉默文库的构建和功能基因筛选模型的初步建立.pdfVIP

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2009, 36(8): 1079~1083 色期番茄果实均一化cDNA 沉默文库的构建 和功能基因筛选模型的初步建立* 王晓光 马远征 王晓辉 李 玲 罗云波 朱本忠** ( 国农业大学食品科学与营养工程学院食品生物技术实验室，北京 100083) 摘要 番茄果实的成熟是由多基因精细调控的一个过程 利用破色期番茄果实，根据复性动力学原理在mRNA 水平进行均 一化操作使高丰度和低丰度的mRNA 丰度接近 然后把均一化之后mRNA 反转录得到cDNA ，再与基因沉默载体pTRV 重 组，最后把构建好的载体通过电转化的方 转入到GV3101 农杆菌中，从而建立起破色期番茄果实均一化cDNA 沉默文库 通过番茄果实 病毒诱导基因沉默技术，对cDNA 沉默文库进行初步筛选，从而确定功能基因筛选模型 在模型建立阶段， 以番茄红素合成途径相关的PDS 基因作为内标基因，在