Wnt1信号通路靶蛋白WISP1的原核表达与纯化.pdfVIP

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2017-09-14 发布于湖北
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国匾煎堑题堂篮銎亟堂盘查!!!!至!旦箜塑鲞箜!塑堑堕』!P型型些!!丛!望堡!垒Q堕!!!!!y!1．塑!墨!：； ·论著· Wnt一1信号通路靶蛋白WISP一1的原核表达与纯化王闻哲吴波丁明建李伟莉宋涛吴式谤王孝举【摘要】目的获得纯度较高的WISP-1蛋白结构域，为进一步开发靶向WISP-1蛋白的药物奠定基础。方法将编码WISP-1蛋白4个结构域的基因克隆到pFNl9A蛋白表达载体中，4个重组质粒分别在大肠埃希菌中诱导表达对应的WISP-1蛋白结构域。用Halo树脂共价层析法纯化目的蛋白。结果获得了4 个重组质粒pFNl9A}“o_IGFBP／Ⅶ汀c／rrsP／C11cK。并在KRX敏感菌株中诱导表达目的蛋白，通过优化诱导条件获得4个高表达结构域蛋白。SDS和Western印迹特异性条带鉴定纯化蛋白的质量大小与预期一致。经BCA蛋白浓度监测，E2中重组蛋白浓度可达到500—1500 m#L。结论通过Halo树脂共价层析法，获得了纯度较高的WISP-l4个结构域蛋白．为研究WISP-1蛋白在肝癌等肿瘤发生发展过程中的关键功能结构域打下基础。【关键词】重组蛋白质类；WISP-1蛋白；Halo树脂；共价层析纯化 Protein and ofWht-1 1(WIsP-1)WANGWen-zhe+， expressionpurificalJoninducible-signalingpathwayprotein WU Molecular Bo，DING Wei—li，SONGTao，IVUShi-xiu，WANG Medicine，Zhe— Ming-jian，LI Xiao-ju．+Centerfor Medical 310013，China of Sciences，Hangzhou j姗Academy fur— Toachievethe recombinantofWISP-1domaitrsand afoundationof 【Abstract】Objectivepure proteins lay four ther onthe of WISP-1．Methodsne whichencodeddomainsofWISP-1 study targetingdrugprotein genes protein withahalo at vector)wereclonedandthe inE．coti．7ne tag were．expressed N—terminus(pFNl9A correspondingproteins were inmlobilizedontoHaloLinkresinsand recombinant proteinseov{lIenfly purifiedbyenzymee]eavage．Results卟e recombinant transformedintothe Halo-IGFBP，Halo-VⅥTC，Halo_TSP，Halo_CI’CK，were pla