丹参水煎液对BMSCs分化为神经元样细胞的诱导作用研究.pdfVIP

18 北方药学2011年第8卷第 1O期 丹参水煎液对 BMSCs分化为神经元样细胞的诱导作用研究△ 胡向阳 马 义 (L中山大学附属第五医院 珠海 519000；2．暨南大学生命科学院 广州 510632) 摘要：目的：研究丹参水煎液诱导BMSCs分化为神经元样细胞的作用，探索提高MSCs向神经元样细胞分化的诱导条件。方法： 全骨髓贴壁法分离大鼠BMSCs，倒置显微镜观察诱导后细胞形态学特征，流式细胞仪进行BMSCs表面抗原鉴定，对诱导后的细 胞进行Nestin、NSE、GFAP免疫细胞化学染色鉴定。结果：培养的细胞经流式细胞仪检测，符合BMSCs表面标志特征。各对照组 诱导后阳性细胞率均高于空白组，P0．01，其中丹参组Nestin阳性细胞率高于B一巯基 乙醇组，P0．01，丹参组NsE阳性细胞率 高于9一巯基乙醇组，P0．05；各诱导组GFAP表达为阴性。结论：丹参水煎液可以诱导BMSCs向神经元样细胞分化。 关键词：骨髓间充质干细胞 细胞分化 丹参 中图分类号：R284 文献标识码：B 文章编号：1672—8351(2011)1 0018—02 近年来，利用干细胞移植治疗神经系统疾病越来越受到 每毫升约含3．3g的原生药药液，药液室温放凉后 ，0．22pan过 人们的关注。骨髓间充质干细胞 bonemarrow—derivedures～ 滤除菌，分装 ，4c保存。 enehymalstem~ells，BMSCs)可分化为骨细胞、神经元细胞、神 2．3诱导BMSCs向神经元样细胞分化 经胶质细胞、肝细胞等，诱导 BMSCs分化形成神经元样细胞， 将待诱导分化BMSCs的分别移至放有无菌盖玻片的6孔 为进一步施行干细胞移植、种子细胞培育、基因传染治疗神经 板中，制备细胞玻片，待细胞融合至 70～80％时，去除DMEM 系统疾病等提供了可能的物质来源 l_『。目前 ，国内外研究主要 完全培养液，D—Hank液清洗 3次，加入含 lmmol／LI3一巯基乙 以化学制剂，如二甲基亚矾、B一巯基乙醇等作为诱导剂，诱导 醇的10％FBS／DMEM培养基预诱导，培养24h后，去除预诱导 后的神经元样细胞体外存活时间短 ，且有一定细胞毒性，因 液，PBS (PH7．1)冲洗三次。空白组加入 10％胎牛血清L— 此，寻找高效、无毒的诱导剂显得十分必要。中药有着基源广、 DMEM培养液，B一巯基乙醇诱导组加入 1．2mmolL／无血清 I，- 药理作用多靶向等优势，其对干细胞诱导分化研究越来越受 DMEM培养液，丹参水煎液诱导组加入 80ul／ml10％胎牛血清 到重视，本实验探讨丹参水煎液诱导体外培养的大鼠BMSCs L—DMEM培养液。 向神经元样细胞分化的作用。 2．4神经元样细胞形态观察 l实验材料 倒置显微镜观察神经元样细胞贴壁情况、形态变化、培养 1．1实验动物 液性状改变、生长速度、折光度等形态学特征等。 sD大鼠，清洁级(SPF)，1月龄 ，雌性 ，体重 100~02g，由广 2．5诱导MSCs向神经元样细胞分化作用比较 东省实验动物中心提供 (合格证号：粤监证)，室 每组各有6个复孔，培养板置于37~C，5％CO培养箱中培 温，适应性饲养 1周后用于本实验。 养，24h后，分别作 Nesfin、NSE、GFAP免疫细胞化学染色，参 1．2实验药物及仪器 照相应的试剂盒说明进行操作 ，计算表达阳性的细胞占所计 B～巯基乙醇购于Sigma公司，丹参饮片购 自广东省中医 数细胞总数的百分 比。比较各组最佳诱导分化浓度诱导后神 院，低糖DMEM(DMEM—LG，Gibco)，优级胎牛血清(TBD)，兔 经元样细胞Nestin、NSE、GFAP表达阳性率。 抗鼠nesfin多克隆抗体、兔抗 鼠NSE多克隆抗体 、兔抗鼠 2．6统计学处理 GFAP多克隆抗体、SABC即用型试剂盒 (武汉博士德公司)， 采用SPSS14．0统计软件进行统计学处理，定量指标以 DAB显色试剂盒 (Gibco)。RCOOOTVBB型 CO：培养箱 (±s)表示，组间比较采用方差分析