超声联合微泡造影剂携p53基因转染宫颈癌HeLa细胞的实验研究.pdfVIP

第3l卷第23期 第 三 军 医 大 学 学 报 Vo1．3l，No．23 2009年 12月 ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE Dec．2009 2323 文章编号：1000-5404(2009)23—2323．04 i季麓麟 超声联合微泡造影剂携 p53基因转染宫颈癌 HeLa细胞的实验研究 唐 艳 ，熊正爱。，李 攀 ，王志刚 ，董培婷 (重庆医科大学附属第二医院：1妇产科，超声影像研究所，重庆400010) 摘 要：目的 探讨超声联合微泡造影剂介导野生型p53(wtp53)基因转染宫颈癌HeLa细胞的可行性、效率性及作 用效果。方法 以前期实验所筛选的超声辐照参数 (300kHz，0．5w／cm ，30s)为实验条件，将HeLa细胞分为质粒组(A 组)、质粒 +超声组(B组)、质粒+超声+微泡组 (c组)、质粒+脂质体组 (D组)、空白对照组 (E组)，分别进行处理。转 染24—48h后，收集各组细胞，荧光显微镜观察细胞基因转染效率、RT—PCR检测 p53mRNA表达，流式细胞仪检测细胞周 期，MTT检测细胞增殖抑制情况。结果 荧光显微镜下见 C、D组均有较多绿色荧光蛋白表达的细胞 (转染率分别为 14．15％和 10．86％)，B组仅有极少的荧光细胞 (0．8l％)；A组和E组无荧光表达；RT—PCR结果显示 ，c组和D组均可见 特异性 p53电泳条带，C组的电泳条带的光密度比值高于 D组(P0．05)；流式细胞仪测细胞周期显示，转染野生型p53 基因能使细胞周期出现明显的G．期阻滞，c、D组与E组相比差异有显著性 (尸0．05)；MTT测定结果显示 C组细胞生长 明显受抑 ，且随时间的延长 ，抑制程度逐渐增强。结论 适当浓度的微泡和优化的超声辐照条件可增强基因转染效率，野 生型p53基因能使 HeLa细胞产生 G期阻滞 ，抑制宫颈癌细胞生长。 关键词 ：超声；微泡造影剂；宫颈癌 ；基因治疗 中图法分类号：R454．3；R73—36；R737．33 文献标识码：A Experimentalstudyofp53plasmidtransfectedintoHeLacellsbyultrasoundm icro- bubbleintensifier TANG Yan ，XIONG Zheng．ai，LIPan ，WANGZhi．gang ，DONG Pei—ring (Department。fObstetricsandGyneco1。gY， InstituteofUhrasonography，SecondAffiliatedHospital，ChongqingMedicalUniversity，Chongqing400010，China) Abstract：Objective Toexplorethefeasibility，efficiencyandeffectofwide—typep53genetransfected intocervicalcancerHeLacellsbyultrasoundmicrobubbleintensifier．Methods Basedontheoptimum param- eterofultrasoundwaveirradiation(0．5W／cm ，30s)selectedinpre．experiment，HeLacellsweredividedin— to5groups：(A)simpleplasmidgroup，(B)plasmid—ultrasoundgroup，(C)plasmid—ultrasound-microbubble group，(D)plasmid—liposomegroup，(E)blankcontrolgroup．At24-48haftertransfection，thetransfeetionef- ficiencywasdetectedbyfluorescencemicroscope，themRNA ex