4基因治疗43基因治疗的方法432.ppt

XR，患者凝血因子Ⅸ缺乏 Ⅸ因子基因定位在Xq26.3-q27.2 临床表现：易出血，凝血时间长，轻伤、小手术后常出血不止 发病率为1/30000 4. 基因治疗 4.4. 基因治疗的临床应用 4.4.2. 乙型血友病 薛京伦（复旦大学） 1991，逆转录病毒 LTR FⅨ SV40 neo LTR 4. 基因治疗 4.4. 基因治疗的临床应用 4.4.2. 乙型血友病 2003，rAAV2-hF.IX 重组AAV-2人凝血因子Ⅸ注射液 4. 基因治疗 4.4. 基因治疗的临床应用 4.4.2. 乙型血友病 薛京伦（复旦大学） 1991，逆转录病毒 细胞因子 1984~1987，淋巴激活的杀伤细胞(LAK) 1986，肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)结合IL-2 1991，肿瘤坏死因子(TNF)治疗黑色素瘤 4. 基因治疗 4.4. 基因治疗的临床应用 4.4.3. 肿瘤的基因治疗 “自杀基因” 1992，HSV-TK 和 GCV 4. 基因治疗 4.4. 基因治疗的临床应用 4.4.3. 肿瘤的基因治疗 pRB，p53，p16，p21，p27 肿瘤抑制基因 4. 基因治疗 4.4. 基因治疗的临床应用 4.4.3. 肿瘤的基因治疗 导入基因的持续表达 导入基因的高效表达 安全性问题 Jesse Gelsinger: 18 yr-old from Arizona, died on 9/17/1999, 4 day after gene transfer in Penn OTCD trial. 4. 基因治疗 4.5. 基因治疗存在的问题及解决方法 药物治疗和饮食控制疗法的原则 基因治疗的概念 目的基因转移的方法 基因治疗的应用 本章节重点、难点 膜融合法 人工脂质体 红细胞影泡 微细胞 原生质球 4. 基因治疗 4.2. 转移的方法 4.2.1. 目的基因的转移 受体载体转移法 4. 基因治疗 4.2. 转移的方法 4.2.1. 目的基因的转移 同源重组法（homologous recombination） 将外源性的目的基因定位导入受体细胞的染色体上，通过与该座位的同源序列交换，使外源性DNA片段取代原位点上的缺陷基因，达到修复缺陷基因的目的。 4. 基因治疗 4.2. 转移的方法 4.2.1. 目的基因的转移 δ β Xba I Xba I Bst I 11.1 kb Δβ Xba I Bst I neo 13.1 kb Bst I δ Δβ neo β Xba I Bst I Xba I Bst I Xba I 16.5 kb 7.7 kb 4. 基因治疗 4.2. 转移的方法 4.2.1. 目的基因的转移 同源重组法（homologous recombination） 病毒介导转移法 以病毒为载体，将外源性目的基因通过基因重组技术，组装到病毒载体上，并使重组病毒感染受体宿主细胞，完成基因转移。 4. 基因治疗 4.2. 转移的方法 4.2.1. 目的基因的转移 逆转录病毒（retrovirus） 优点 能高效转染宿主细胞，转染率可达100％ 宿主范围广泛 可转染大量细胞并长期停留，病毒基因和所载的外源基因都能表达 4. 基因治疗 4.2. 转移的方法 4.2.1. 目的基因的转移 缺点 病毒容量有限（7 kb） 随机插入 有致癌作用 4. 基因治疗 4.2. 转移的方法 4.2.1. 目的基因的转移 逆转录病毒（retrovirus） 小鼠白血病病毒（Mo-MLV） 5 ? LTR LTR 3 ? ? U3 R U5 U3 R U5 gag pol env Exogenous gene 4. 基因治疗 4.2. 转移的方法 4.2.1. 目的基因的转移 逆转录病毒（retrovirus） 逆转录病毒载体的包装 4. 基因治疗 4.2. 转移的方法 4.2.1. 目的基因的转移 逆转录病毒（retrovirus） 腺病毒（Adenovirus, AV） 优点 宿主范围广；插入DNA片段较长 病毒颗粒稳定，易于浓缩和纯化 不整合，减少插入突变的潜在危险 4. 基因治疗 4.2.