脊尾白虾血蓝蛋白基因cDNA的克隆与表达分析.pdfVIP

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2017-09-13 发布于重庆
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脊尾白虾血蓝蛋白基因cDNA的克隆与表达分析.pdf

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第 33卷第 6期渔业科学进展 Vo1．33，NO．6 2012年 12月 PROGRESSIN FISHERY SCIENCES Dec．。2O12 脊尾白虾血蓝蛋白基因cDNA的克隆与表达分析于戈李健李吉涛李华 (大连海洋大学，116023) (农业部海洋渔业可持续发展重点实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所，青岛 266071) 摘要应用RACE技术克隆了脊尾白虾血蓝蛋白基因全长 cDNA 序列，并对该序列进行了分析。结果显示，该基因全长 2158bp，开放式阅读框长 1992bp，5’非编码区长26bp，3’非编码区长 140bp，将该基因命名为EcHc。EcHc编码 663个氨基酸，前 15个氨基酸组成信号肽，推测成熟肽的分子量为 75．05kDa。Blast比对结果显示，由脊尾白虾血蓝蛋白cDNA序列推导的氨基酸序列与日本沼虾、信号小龙虾血蓝蛋白氨基酸序列的同源性分别为86 、68 ，由此推断该 cDNA序列可能属于血蓝蛋白家族。利用Real—timePCR方法，分别研究了鳗弧茵和白斑综合征病毒 (wSSV)感染脊尾白虾后，肝胰腺组织中EcHc基因在不同时间点的表达变化。实验结果表明，细菌或病毒感染后，EcHf基因在肝胰腺组织中的表达量显著增加，且均在感染后 6h达到最高值，揭示脊尾白虾血蓝蛋白基因EcHc在脊尾白虾的免疫防御中具有重要作用。关键词脊尾白虾血蓝蛋白基因克隆表达分析中图分类号 Q785。$917 文献识别码 A 文章编号 1000—7075(2012)06—007407 cDNA cloningandexpression analysisofhemocyanin geneinExopalaemoncarinicauda YU Ge，。 LIJian LIJi—tao LIHua (DalianOceanUniversity，116023) (KeyLaboratoryofSustainableDevelopmentofMarineFisheries，MinistryofAgriculture， Yellow SeaFisheriesResearchInstitute，ChineseAcademyofFisherySciences，Qingdao266071) ABSTRACT In thisstudy，ahemocyanin cDNA namedEcHCwasclonedfrom thehepato— pancreasoftheridgetailwhiteprawnEzopalaemoncarinicauda byreversetranscriptionPCR (RT—PCR)andrapidamplification ofcDNA end (RACE)methods．Thefull—lengthcDNA of EcHcwas2158bpandhadanopenreadingframe(ORF)of1992bpencoding663aminoacids whichcontainedasignalpeptidesequence(1——15aminoacidresidues)．Thepredictedmolecular weightofthematurepeptidewas75．05kDa，andthetheoreticalp1was5．69．Thehomologya— nalysisofEcHcwithotherhemocyaninshowedhighersimilaritywithMacrobrachium nippon— ense(86