两种方法检测乙型肝炎血清学标志物的应用比较.pdfVIP

2011年 9月第 4卷第 9C · 85 · · 临床 医技 · 两种方法检测乙型肝炎血清学标志物的应用比较 戴 薇，肖九长，冯 清，李 虹 【摘要】 目的 分析时间分辨荧光免疫技术 (TRFIA)定量检测乙肝两对半的临床应用。方法 采用酶联免疫 吸附试验 (ELISA)和时间分辨荧光免疫分析法，分别对患者进行乙肝两对半检测。结果 TRFIA法同ELISA法比较， 两种检测方法的差异有统计学意义。结论 耵t兀A检测乙肝两对半，灵敏度高，稳定重复性好，可作为乙型肝炎病毒 定量的一种常规方法。 【关键词】 时间分辨荧光免疫技术；酶联免疫吸附试验；乙肝两对半 【中图分类号】R575．1 【文献标识码】B 【文章编号】1674—3296 (2011)09—0085—02 时间分辨荧光免疫技术 (TRFIA)是近十年发展起来的一 肝二对半模式有：1．3．5、1．4．5、2．4．5、2．5、I．5、4．5、2、 种微量分析方法，其灵敏度高，最小检出量可达 l0—18otol／ 4、5、全阴；TRFIA法除检出了上述几种模式外，还检出了 L，已被广泛应用于乙肝两对半的定量检测。TRFIA是用镧系 1．2．4．5、1．3．4．5、2．3．5模式。有 8例 TRFIA检测模式 为 元素Eu“ (铕)螯合物作为示踪物标记抗原或抗体，在免疫 1．2．4．5，ELISA检测模式为 1．4．5；有3例ELISA为4．5模式 反应完成后加入增强液，将 Eu”从标记抗原或抗体上解离下 的标本，经TRFIA检测模式为 1．4．5，有 5例乙肝表面抗原 来并与增强液中的组分形成新的具有强烈荧光的螯合物，用特 ELISA为阴性 (灰区范围S／CO0．9—1．0)，TRFIA1ng／ml 定的仪器测定荧光强度，从而判断反应体系中被测物浓度。本 的标本后经跟踪随访 ELISA都为阳性。 研究对 240份血清标本用TRFIA定量和 ELISA定性法检测， 2．2 TRFIA法与ELISA法测定 240例血清乙肝两对半结果见 其结果进行比较，现报道如下。 表 1。 1 材料与方法 3 讨论 1．1 标本来源 收集我院住院病人、门诊及体检人员血清标 目前临床检测乙肝五项定性多采用ELISA法，由于各试 本240例，一2O℃保存。 剂生产厂家所采用的包被物基 片段的差异、操作步骤有所不 1．2 仪器与试剂 ELISA法检测试剂由厦门新创有限公司提 同 (一步法、二步法)及操作时差、污染等凶素的影响，致 供 ，运用安图洗板机洗板及安图酶免分析仪进行检测。TRFIA 使检测结果容易出现偏差。一步法简单快速，但当标本中的待 法使用上海新波生物技术有限公司生产的Anytest时间分辨荧 检物质浓度过高时会因钩状效应现象出现假阴性结果，而造成 光免疫检测系统及配套试剂。 漏检…，ELISA定性 由于是手工操作，在实际操作中受影响的 1．3 方法 对 240份血清分别用ELISA法定性检测和TRFIA 凶素比较多，在加样第一份标本与最后一份标本的间隔时间比 法定量检测 HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBc．Ab，两种 较大，并且对HBsAg浓度 1ng／ml的标本进行检测时，显色 方法均严格按试剂盒说明书要求进行质控样品和临床标本检 较弱 (灰区范围)，不易判断，甚至造成漏检。 测 。 时问分辨标记物 “铕”的荧光寿命长，能延缓测量时间 1．4 mFIA法的阳性判断标准 HBsAg~0．2ng／ml，HBsAb≥ 等待测样品中的自然荧光完全淬灭后，再测定 “铕”的荧光 10mlU／ml，HBeAg~0．5PEIU／ml，HBeAb≥0．2PEIU／ml，HB— 信号，这样就能消除非特异性荧光的干扰，