苍山大蒜低聚糖纯化技术及分子质量测定.pdfVIP

苍山大蒜低聚糖纯化技术及分子质量测定 张民，杜微娜，毕华，刘建 (天津科技大学食品工程与生物技术学院，天津，300457) 摘 要 文中研究了苍山大蒜中低聚糖(GOS，garlicoligosaccharide)的分离纯化技术，并测定其分子质量。分别 研究了聚酰胺柱色谱法对蛋 白质的脱除效果；离子交换色谱法，有机溶剂沉淀法和葡聚糖凝胶色谱法对 GOS的 纯化效果。结果表明：聚酰胺色谱柱对大蒜粗糖中蛋 白质有 良好的脱除效果，糖回收率为98．9％，蛋 白质脱除率 为66．8％；DEAE．纤维素(OH一)色谱柱可将大蒜低聚糖分为 3个组分；乙醇分级沉淀可将大蒜低聚糖分为8个 组分 ；SephadexG．25纯化后的GOS的HPLC测定结果表 明，其纯度为99．1％，Mw／Mn=1．31，数均分子质量为 1770u。 关键词 大蒜 ，低聚糖 ，分离纯化 大蒜 中的糖类物质是蒜 中的主要活性成分之 有限公司；高效液相色谱系统 ，日本岛津公司；高效 。 一 。 大蒜低聚糖属杂果聚糖 。 ，具有益生元 的 液相色谱柱 (OHpakSB一802．5HQ)日本岛津公司。 作用 。低聚果糖具有双向调节人体肠道微生态的 1．3 方法 功能，且难以被人体消化吸收，是一种低能量 的糖 ，不 大蒜粗糖提取采用本实验室前期建立 的方 会引起肥胖 。低聚果糖作为一种水溶性膳食纤维 ，能 法 。 降低血清胆固醇和甘油三酯含量 ，所 以低聚果糖也可 1．3．1 蛋 白质 的脱除 作为高血压、糖尿病和肥胖症等患者使用的甜味剂。 1．3．1．1 Sevag法对蛋 白质的脱除 由于大蒜产地和品种的不同，对经分离纯化得到 称取 10．0g粗糖干粉溶于 100mL蒸馏水 中配 的大蒜多糖性质的研究报道并不一致 。苍 山大蒜的 成粗糖溶液 ，加入 Sevag试剂 [(三氯 甲烷)：V(正丁 外形较差，不宜作为商品直接出售。但苍山大蒜富含 醇)=5：1]，加入量为 (粗糖溶液)：V(Sevag试剂) 低聚糖 ，具有较高的开发利用价值 。本文建立了苍山 = 5：1，剧烈振摇 20rain，静置 30min，3000r／min离 大蒜低聚糖的分离纯化技术 ，并测定其分子质量。 心15min，收集上清液 ，重复操作数次 ，至无变性蛋 白 1 材料与方法 质出现为止。考马斯亮蓝 G．250法测定蛋 白质含 量 ¨ ，苯酚．硫酸法测定总糖含量H ，计算糖损失率 1．1 材料与试剂 和蛋白质脱除率。 大蒜，苍山大蒜 ；聚酰胺 (30～60 目)，国药集团 1．3．1．2 聚酰胺柱色谱法对蛋白质的脱除 上海 试剂 公 司；DE一52，Whatman公 司；SephadexG· 取一定量的大蒜粗糖上样 (2．5cm ×34cm)， 25、蓝色葡聚糖．2000，Pharmacia公司；果糖标准品， 蒸馏水洗脱 ，分别采用苯酚．硫酸法和考马斯亮蓝 G． Amresco公司；多糖标准品，Fluka公司；其他试剂均 250法测定洗脱液 中的总糖和蛋 白质含量。计算糖 为国产分析纯。