以bar基因为筛选标记转基因大豆的获得及鉴定.pdfVIP

第 3O卷 第6期 大 豆 科 学 V01．3O No．6 2011正 12月 SOYBEAN SCIENCE Dec． 2011 以bar基 因为筛选标记转基 因大豆的获得及鉴定 卢 涛 ，李红艳 ，章洁琼 ，胡小南 ，寿惠霞 ，唐桂香 (1．浙江大学 农业与生物技术学院 作物科学研究所，浙江 杭州 310058；2．浙江大学 生命科学学院植物研究所，浙江 杭州 310058) 摘 要：在 已优化的大豆农杆菌介导转化体系基础上 ，以发芽 1—2d的成熟大豆子叶节为外植体，以bar基因作为筛 选标记基因，采用农杆菌介导法将胰蛋 白酶抑制剂基因(Sporamin)和几丁质酶基因(ChitinaseKDEL)转入大豆品种 YC一2中。Tn代得到生根苗 115株 ，其中采用除草剂叶片涂抹法和 目的基因PCR检测法鉴定出阳性植株45株，其中选 取的6个rr0代植株中有4个独立株系外源基因在T代遗传，其中2个T】代株系呈3：1的遗传分离比例，2个T代株系 分离比例大于3：1。To和T代经草丁膦叶片涂抹法鉴定为阳性的植株，通过 bar试纸条法和 目的基因PCR检测法鉴 定也均表现为阳性，因此，135mg·L 草丁膦叶片涂抹法可用于草丁膦筛选标记转基因大豆植株的大规模筛选。 关键词：bar基因；转基因大豆；后代鉴定 ；草丁膦筛选 中图分类号：$565．1 文献标识码 ：A 文章编号：1000-9841(2011)06-0895-06 Acquisition and Identification ofTransgenicSoybean usingbarasa Selective Agent LU Tao ，LIHong．yan ，ZHANG Jie．qiong，HU Xiao—nan ，SHOU Hui．xia ，TANG Gui．xiang (1．InstituteofCropScience，CollegeofAgncultureandBiotechnology，ZhejiangUniversity，Hangzhou310058；2．InstituteofPlantScience，Collegeof LifeScience，ZhejiangUniversity，Hangzhou310058，Zhejiang，China) Abstract：OnthebasisofoptimizedsoybeanAgrobacterium—tumefaciensmediatedtransformationsystem，thetrypsininhibitor gene(sporamin)andchitinasegene(chitinaseKDEL)weretransformedintosoybeancultivarYC一2usinggerminated1-2days maturecotyledonnodeasexplantsandbargeneasaselectableagentinthispaper．Onehundredandfifteenputativetransgenic soybeanplantshadbeengotandonly45plantswerepositivetransgenicplantsidentifiedbyleafpainting135 mg·L一 Basta andpolymerasechainreaction(PCR)methods．SixT0positiveplantswerechosen，andfourindependenttransgenicplantscould beinheritedintoT1progenyandthesegregationrateoftwoT1progenieswere3：1，theothertwoT1progeniesweremorethan 3：1．Theresultssuggestthatleafpainting135mg L‘ Bastacouldbeaneffectiveandcostlessmethodtodetectgenetically modifiedsoybeansprogenywithbargeneasaselectiveagent． Keywo