灵芝孢子粉多糖的PMP-HPLC指纹分析.pdfVIP

灵芝孢子粉多糖的PMP-HPLC指纹分析 王浩豪，戴军，陈尚卫，朱松 (江南大学食品科学与技术 国家重点实验室 ，江苏 无锡 ，214122) 摘 要 采用部分酸水解耦合 PMP柱前衍生反相高效液相色谱法对 15个不 同灵芝 (赤芝)孢子粉样 品中多糖 进行检测和指纹表征，研究建立灵芝孢子粉多糖的HPLC指纹 图谱。标定了19个共有特征指纹峰，同一产地不 同批次产品间的相似度均大于O．97，不 同产地产 品间的相似度大干 0．8；赤芝孢子粉与其他不 同部位及不 同品 种 的灵芝类产 品的多糖指纹 图谱显示 出较大的差异 。这些相似性和差异可作为灵芝孢子粉产品质量监控 、与其 他不 同部位和不 同品种 的灵芝类产 品的区别鉴定 以及灵芝孢子粉 的真伪与掺假检测的主要依据之一。 关键词 灵芝孢子 ，多糖，色谱指纹 图谱 ，部分酸水解 灵芝 『Ganodermalucidum (1eyss．ex．fr．)karst]是 1 实验部分 真菌门，担子菌纲 ，多孑L菌科 ，灵芝属的真菌，是我国 传统的食药两用真菌 ¨ 。广义上的灵芝包括灵芝 1．1 仪器与试剂 属 的所有种类 ，狭义上则指最常见 的赤芝 品种 。 1．1．1 仪 器 灵芝孢子 (Ganodermalucidum spore，一般来源于赤 Agilentl100液相色谱系统 ，全 自动进样器 ，二极 芝)是其子实体成熟期从菌盖弹射出来 的灵芝种子 ， 管阵列检测器 (DAD)；Agilentl100色谱工作站。 凝聚了灵芝的精华 。由于现代科学研究证实灵芝确 1．1．2 试剂及样 品 具有显著的抗衰老、抗肿瘤 、降血糖、免疫调节等多种 单糖标准品：葡萄糖 (Glc，99％)、甘露糖 (Man， 生理功效 ，加之我 国悠久的灵芝文化传承，故近 99％)、半乳糖 (Gal，≥99％)，均购 于上海化学试剂 年来有关灵芝及灵芝孢子粉的研究和市场开发十分 公司 ；鼠李糖 (Rha，≥99％)、岩藻糖 (Fuc，≥99％)、 火热 。但因缺乏科学有效的检测方法和质量标准 ，大 葡萄糖醛酸 (GlcUA，≥99％)、半乳糖醛酸 (GalUA， 量人工培育生产的灵芝孢子粉、子实体和菌丝体及其 ≥97％)，均为美 国 Sigma—Aldrich公司产 品；木糖 加工产品的质量 良莠不齐 ，难 以对其进行有效控制和 (Xyl，98％)、氨基葡萄糖 (GlcN，98％)、氨基半乳糖 鉴别 ”。因此 ，本文拟针对灵芝孢子粉的主要功 (GalN，99％)，均为美 国ACROSORGANICS公司产 效成分——多糖类物质 ，根据其部分水解产物与组成 品；核糖 (Rib，99．0％)、阿拉伯糖 (Ara，99％)，均 及结构相关 (组成及结构又与其活性和质量相关)的 购于厦门星隆达生化试剂有限公司。衍生化试剂：1． 思路和多糖大分子难以直接高效分离和检测的特点， 苯基0一甲基-5．吡唑琳酮 (PMP)，纯度 99％ (美国Ac— 首次采用部分酸水解耦合柱前 PMP衍生化 一反相 rosOrganics公司)；乙腈 ，HPLC级 (美 国 Tedia公 HPLCt43分析方法检测和表征其特性 ，通过若干有代 司)；三氟乙酸 (TFA)，纯度不低于99％ (国药集 团化 表性的不同来源的灵芝孢子粉及其他不 同部位和不 学试剂有 限公司)。水 ，超纯级 ；其它试剂均为分析 同品种的灵芝类样品中多糖组分的指纹分析研究，构 纯 。 建了灵芝孢子粉多糖 的HPLC标准指纹图谱 ，比较了 灵芝孢子粉样 品：15个批号分别采 自山东 、安 不 同部位和不同品种的灵芝类样 品中多糖组分的指 徽、福建 、吉林 、湖北、浙江等不同产地。 纹特征及差异 ，以期用于实际样品的质量