携改良型HBVpre-S1基因表达载体的构建及表达.pdfVIP

·3 8 · 湖北医药学院学报( J HBUM) 20 12年2月．3I( 1) ：38 ·论． 著 · 携 改 良 型 HBVpr e— S1基 因 表 达 载 体 的 构 建 及 表 达 刘小波1，董荣坤1，甘云辉2，黄建朋1，张征 1，夏冬2 ，徐亮2，昊宏杰 1 ( ‘湖北医药学院附属人民医院普外科，湖北十堰442000 ；2泸州医学院附属医院胃肠外科，四川泸州040000) [ 摘要】 目的：构建携改 良型HBVpr e—SI 基因表达载体。方法：以我国HBV流行株adr 的DNA为模板，PCR法 提取并扩增HBVpr e- s 1，用定点突变延伸法完成突变 。将突变后 的HBVpr e- S1基 因片段通过双酶切，转化到制备好 的DI- I Sa 感受态细胞 中，纯化、质粒测序后 。用醋酸锂法转化酵母细胞AHl 0 。表达产物进行SDS—PAGE电泳分析 和Wes t er n免疫印迹检测。结果：成功扩增出HBV流行株adr 的HBVpr e—SI 基因片段，成功完成HBVpr e—SI 基因的 突变，重组质粒pCBKl 7一HBVpr e—S1构建成功 。Wes t er n免疫 印迹分析，显示对照无表达 ，而转化了pcBKT7 ·HB- Vpm．SI 的印迹分析可见明显 目的基因蛋 白条带且无杂带。瞎论：成功扩增出HBVpr e- S1基因片段并构建出携改 良型HBVpr e - SI 基因表达载体 ，并在酵母中融合表达成功。 [ 关键词 】HBVpr e —Sl ；基因突变；真核表达载体；酵母细胞 [ 中图法分 类号 】 Q786 [ 文献 标识 码】 A 【文章编 号】 1006— 674( 20 12) 0 1- 038一04 Br i ng I mpr ove d HBVP他团Gene Expr e ssi on Vect or and Expr - - 嘲on LI UXi ao —bo ‘，DONC Rong —kun ‘，GAN Yt m- hui 2 ，HUANGJ hn ．p％gI ’ZHANG Zh en 1 ，XI A Don ／，XU u ∞ 2，WU Hong- J i el ( 1Dep ar t men t of C, as t r oent er ol ogi ca l St t r gr y ，Renmi n Hos pi t al ，Hubei Uni ver si t y矿Me di ci ne ，shi yan ，I I ubei ，442 000，Chi na ；2Depa r t men t 旷Gas t r oi n t est i n al Sur - ge可，Th e Aff i l i a t ed Hospit al ofl mzhou Me di cal Col lege ，厶￡如 ‘，Si chuan 64 600 0，Ch i na ) Ab st r ac t ：Obj e ct i ve To comt r ue t modi f i ed HBVp r e—SI ge ne expr es s i on v ec t or ．Met hods The gen e of HBVs t ra i ns a dr wa s us e d鹕t emp l at e t o e xt r a ct a nd ampl i f y HBVpr e - Sl DNA．and t hen t he HBVpr e—S 1 gen e wa s mu t a t ed by s i t e- di r ect ed ma t a- genes i s ．The mu t a t ed HBVpr e—S 1 gen e f r agment WAg t r an sf or med i nt o DHSa co