小鼠眼球标本固定液及制片方法的改善.pdfVIP

小鼠眼球标本固定液及制片方法的改进 罗灿峤 梁英杰 吴惠群 钟觉民 梁惠珍 （中山大学附属第一医院病理科，广州! #$$%$ ） ! ! ! ! 〔关键词〕! 眼球；! 固定；! 固定液；! 染色 ! ! ! ! 〔中图分类号〕! ’(() *#! ! 〔文献标识码〕 ! + ! ! 在小鼠眼球标本石蜡切片制作过程中，由于眼 没有明显变化，没有皱缩和凹陷变形，基本上能保 球组织结构的特殊，各部分组织的软硬度不同，各 持原有的状态和外形，色泽亮白透明；显微镜镜下 层组织之间连接性差，如用常规#$/ 甲醛液固定， 可观察到眼球各层组织结构完整，无明显结构改 眼球经过固定后用乙醇脱水，各层组织由于收缩率 变，未见视网膜的脱落和分离，眼球各层组织结构 的不同容易造成组织分离，特别是造成视网膜的分 清晰无裂隙。切片厚薄均匀，没有脱片现象。组织 离甚至脱落［#］。其他的一些固定液虽然可以保证 细胞间无龟裂变形，无细胞过度收缩和膨胀，未见 眼球内部各层组织完整，但是细胞肿胀肥大，细胞 组织的自溶；细胞核仁、核膜清晰，染色质均匀， 着色不均匀，给在显微镜下观察带来困难。因此我 色泽亮丽，颜色对比明显。 们结合眼球的结构特点，总结出一种比较适合固定 讨! ! 论 眼球组织的固定液以及采用适当的取材方式，有助 于制作高质量的眼球组织01 片，介绍如下。 由于眼球组织结构的特殊性，在石蜡切片制作 过程中，需要做一些特殊处理，选择合适的固定 材料和方法 液。固定液中加入冰乙酸，能加强固定液对组织的 #2 混合固定液的配制! 冰醋酸 # 份，甲醛液 浸透作用，加快固定组织的速度。冰乙酸对组织的 ( 份，生理盐水. 份，. / 乙醇#$ 份混合而成。 穿透力强，但会使组织膨胀［( ］，一般不单独用于 (2 取材和固定! 取健康的小白鼠数只，常规 固定组织，并且固定时间要短，因此许多混合固定 方法处死后即摘取眼球（保留视神经长约( 34 ）， 液都含冰乙酸。为了克服冰乙酸固定时间长容易使 投入混合固定液中室温下固定$) 5 ，待眼球表面 组织膨胀的缺点，混合固定液中加入乙醇，乙醇也 变硬后从眼后房注入固定液再固定(5 ，然后用锋 可以用于固定组织，对组织有收缩作用，可以抵消 利的刀片或眼科小剪刀在眼球的上下部各开一个小 冰乙酸对组织的膨胀，而且组织能在低浓度乙醇溶 口，室温下固定(5 ，然后投入#$/ 的中性甲醛固 液中较长时间保存。眼球组织在开始固定时不用 定($5 ，常规脱水，按眼球前后径水平方向用,$6 #$/ 中性甲醛，而先用含生理盐水的混合固定液， 石蜡包埋。 是因为中性甲醛固定液含有较多磷酸盐，渗透压较 ’2 切片和染色! 包埋的蜡块经适当冷冻后切 高，在固定过程中容易使眼球内份分析出后，眼球 片，切片深度以切到视神经和角膜在同一水平线为 内外压力不同而造成眼球变形。由于眼球组织的特 宜，厚度为7 !4 ，,$6 烤片 (5 ，常规 01 染色， 殊结构，固定液很难有效、快速地渗透入眼球的内 中性树胶封片，显微镜下观察。 部，往往由于固定不及时而造成眼球内部组织固定 不好，引起组织自溶和内部组织的分离，特别是视 结! ! 果 网膜的脱落，所以在眼球的后