现代生物技术---蒲小平部分范爱丽版.docVIP

蒲小平部分 一 细胞超微结构和电子显微镜技术 1细胞超微结构的研究内容（思考题+答疑重点）： 1. 核酸和蛋白质：DNA-扫描隧道显微镜下：螺旋距离2.7nm,含10个bp 蛋白分子——电镜负染技术 2. 病毒颗粒 3. 细菌(原核细胞) 4. 真核细胞——完整的功能单位和代谢体系 2电子显微技术：TEM SEM（答疑重点+思考题——两者应用有何不同） １． 透射电镜（TEM）：透射成像，图像是二维的，靠欠焦形成一定的图像反差。 透射电镜标本制备：（答疑重点。觉得可能是填空） Ａ。取材：尽可能保持活状态，避免损伤，必须耐真空，由于电子穿透力弱，标本必须超薄，标本反差应尽可能大（生物材料原子系数低，图像反差差，不易出现明暗差别） Ｂ。固定：为防止生物榈在死亡后和脱水过程中产生结构改变，离体生物标本迅速固定。常用戊二醛和四氧化锇固定。戊二醛在蛋白质分子间形成共价键，将它们交在一起。四氧化锇除与蛋白质共价结合外，还对脂类有良好的固定效果。 　　　　Ｃ。脱水：标本须置于高真空中进行电镜观察，但电镜不能观察含水的标本，故需经脱水处理。另外由于埋剂与水不互溶，用脱水剂可将组织中游离水脱去，有利于包埋。 　　　　Ｄ。包埋：为使柔软生物组织制成超薄切片，并使切片耐受高真空、电子轰击，则在切片前将标本进行包埋，常用环氧树脂。 　　　　Ｅ。切片：电子穿透力很弱，需将样品制成50~100nm厚的薄片