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农业生物技术学报， 年， 第 卷， 第 期， 第 页
2011 19 4 711~718
Journal ofAgriculturalBiotechnology,2011,Vol.19,No.4,711~718
研究报告
A Letter
loxP Lox2272 载体的构建及牛胎儿转基因阳性细胞筛选程序的
pEGFP
优化
，
1 2 2 2 2 2 2 2 2 1*
王帅 赵学明 朱化彬 杜卫华 郝海生 王栋 刘岩 秦彤 王宗礼
1 730070 2 100193
甘肃农业大学动物科学技术学院， 兰州 ； 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所， 北京
* wangzongli@
通讯作者，
摘 要 绿色荧光蛋白 是一种分选细胞的理想标记， 将绿色荧光蛋白基因定点整合到牛的 染色体
(GFP) Y
上是利用 分选 和 精子的关键。 本研究通过特殊的引物设计和高保真酶 扩增将 loxp 位点和
GFP X Y PCR
Lox2272 位点引入 载体中，构建了重组质粒 loxp Lox2272 。 采用 TM
pEGFPN3 pEGFP Lipofectamine (Lip)
2000介导线性化质粒 pEGFPloxp Lox2272 转染牛胎儿成纤维细胞，结果显示，在质粒用量一定的情况下 30
滋 转染细胞的效果最理想；转染后的牛胎儿成纤维细胞用 筛选，结果显示，浓度为
LLip2000 G418 600
滋 的 最适合筛选转基因细胞。本实验的结果为载体改造提供了一种有效的方法并为牛体细胞基
g/mL G418
因打靶阳性细胞系的筛选提供了重要的技术参考。
关键词 绿色荧光蛋白， 阳性细胞筛选， 基因打靶， 载体构建
loxp Lox2272
ConstructionofaVectorpEGFP and Optimizationof Procedure
forSelectingTransgenic BovineFetalFibroblasts
1,2 2 2 2 2 2 2 2
WangShuai ZhaoXuem
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