登革病毒毒力基因的筛选与鉴定研究.pptVIP

登革病毒DENGUE VIRUS “我其实是个烂人。无论作为父亲、儿子还是丈夫，尤其是作为球员，我知道自己毛病不少。……（但）我想再次加入国家队，以便给大家带去更多的欢乐。” ———罗马里奥致斯科拉里 生物学特性 ★ 球形颗粒 ★ 直径45~55nm 单股正链RNA 核衣壳 壳体蛋白C 脂双层膜 分型 ? 根据其特异性抗原的不同 四种血清型（1~4型） 培养 ● 白纹伊蚊传代细胞（C6/36细胞） ● 猴肾、地鼠肾原代和传代细胞 ● 黑猩猩、恒河猴、长臂猴、狒狒：与人类相似的病毒血症，却无任何症状。 致病性 ● 丛林型疫源地地区 猴类动物 传播媒介 埃及伊蚊和白纹伊蚊 人群易感性 儿童第二次感染登革2型病毒时，较易发生登革出血热。 登革热（dengue fever, DF) ● 潜伏期3~14日，平均4~7日。 ● 主要表现为发热和分散的斑疹和丘疹。 ● 很少需要用支持疗法。 登革出血热（dengue hemorrhagic fever,DHF） ● 潜伏期不清楚。 ● 发病时以急性高热和许多与DF相似的症状开始，但昏昏欲睡和昏睡症状更为明显，通常在发病第三天出现出血症状，胸、四肢和腋出现瘀斑。胃肠道、鼻和牙龈都可能相继出血。 皮下出血 登革休克综合症（dengue shock syndrome, DSS） 血浆进入外渗区造成的渗漏会进一步导致DSS，患者会出现脉搏快速而虚弱、低血压、寒战和疲惫等症状。除了由常见的脉管炎引起的血浆渗漏外，还存在散布的血管内凝血。 微生物学检查 病人 微生物学检查 病毒分离 ● 白纹伊蚊C6/36细胞微量培养是目前分离登革病毒最敏感、最简便、分离阳性率又最高的一种方法。 血清学检查 检查患者血清抗体时，用两种以上的方法得到的结果均为阳性，且双份血清抗体效价?4倍增高时才有诊断意义。 分子生物学方法 斑点杂交、RT-PCR适于早期诊断 传染源主要是病人：发病前数小时到病后3~5日传染性最强。 治疗 尚无特效药物治疗登革热 基础治疗：卧床休息，避免劳累，多饮水，常进菜汤、果汁等流质或半流质食物。 对症治疗：补液、用退热剂和镇痛药控制发热和疼痛等。 登革出血热 对症治疗：包括补充血容量、调整电解质平衡，纠正休克和控制出血等。 预后 一般预后良好，不存在携带者。 实验室生物安全防护 血液 脑脊液 中枢神经系统或其他组织 以及受染的节肢动物中 DF实验室相关性感染的基本途径 ★病毒意外经胃肠道外途径注入体内 ★受损的皮肤或黏膜接触到病毒 ★被已接种实验室啮齿或节肢动物咬伤 ★传染性气溶胶可能是潜在的传染源 ★ 未做好防护措施（没穿长袖背后系带的工作服，未戴手套、面罩及护目镜） ★ 有3例在实验操作中未使用生物安全柜 ★ 实验室人员处理的都是高浓度的病毒 抵抗力 ● 对乙醚和酸敏感 ● 紫外线照射、福尔马林、高锰酸钾、离子型或非离子型去污剂灭活 ● 56℃处理30分钟都可灭活 ● 可以在-70℃或冷冻干燥状态下长期保存 小 结 ★ 登革病毒主要通过埃及伊蚊和白纹伊蚊传播。 ★ 登革病毒为三类病原微生物，涉及活的登革病毒的实验应在BSL-2级实验室中操作。 * * 登革病毒—骑在蚊子身上的火枪手 我国登革热属输入性，台湾、广东、海南、广西、云南。 2001年8月6日中午，泰国参议院负责旅游的有关官员，及泰国旅游局香港办事处的有关负责人在北京召开了一个面对新闻媒体和旅行社的“泰国旅游研讨会”，向中国公众解释近日以来骇人听闻的“登革杀人”事件。 谁的眼泪在飞？ 我的眼泪你看到了吗？ 登革病毒颗粒电子显微镜图 ? 各型病毒间抗原性有交叉 ● 用已适应在鼠脑组织中复制的登革病毒经脑内接种可使小鼠产生脑炎。 传染源 自然宿主是人、低等灵长类动物和蚊。 ● 城市型疫源地地区 隐性感染者和病人 猴 最有效 人群普遍易感 感染后产生的同型免疫抗体保持终生 同时获得对其它血清型的免疫能力（异型免疫）仅持续6~9个月 较严重的DF 头痛和眼眶后疼痛、关节痛、肌痛，皮疹和丘疹突然出现。热病期通常持续6日，疹会扩散为红斑。 胰腺组织切片 一、样本采集 采集吸过血的埃及伊蚊，白纹伊蚊或其他可疑蚊种，用研磨器研碎，取上清液。 可取血、脑脊液、脑组织、肝等。 无菌采集发病后5d内静脉血3mL，放冰壶送实验室分离血清接种细胞进行组织培养。 尸体检材 蚊 ● 在实验动物中，以脑内途径接种1-2日龄乳鼠最为敏感。 ● 成蚊白纹伊蚊的亲代接种