手工显微切割技术在基层实验室的应用.pdfVIP

第 26卷 第 6期 长治医学院学报 V()I．26 NO．6 2O12年 12月 JOURNA1 ()F CHANGZH I MEDICAL C()【LEGE Dec． 2012 459 手工显微切割技术在基层实验室的应用 郭建猛 闰曙光 程丹桂 摘 要 目的：分析手工显微切割技术在基层 实验 室的应用价值 。方法：结合基层 实验 室的客观条 件 ，应用手工显微切割技 术于病理切片分 离 目标细胞。结果 ：本技术共成功分离 36例 目标细胞。结论 ：手 _ g-显微切割具有操作简便、经济实惠、准确性较 强的特点，尤其适合基层实验室使用 ， 关键词 手工显微切割 ；基层实验室；技术 中图分类号 R814．4 文献标志码 A 文献编号 1006一(2012)06—459—02 显微切割技术 (microdissectiontechnique)是 箱，消化 36～48h(时间视组织消化情况定，但一 在显微状态或显微镜直视下通过显微操作系统对 定消化完全，肉眼观察消化液呈清亮状)。用 PCR 欲选取的材料 (组织 ，细胞群 ，细胞 ，细胞内组分或 仪 95。C，10min，灭活蛋 白酶 K，终止消化反应 (必 染色体区带等)进行切割分离并收集用于后续研究 须完全灭活，否则会影响Taq酶 的活性)，超低温 的技术 。手工显微切割纯化技术在组织纯化领域 离心机 10000～15000转 ／min，离心 5min，制成 内的全面应用 ，推动了肿瘤基 因组学研究 的发展 ， DNA样本液放人 4。C冰箱保存 (如近期不用 ，可保 在我实验室应用 中，起到 了至关重要的作用 ，现报 存于一2O℃，但时间过长 ，DNA会 降解 ，2周内最 告如下 。 好用完 ，后期可适 当增加样本量以确保 PCR的模 l 实验材料 板量)。另外 ，在刮取时注意 ，正常组织中可以带入 1．1 阅片 少量的不正常组织，不影响结果 ，但高级不典型增 首先区别所研 究肿瘤 的 良恶性 ，癌前病变和 生组织中不能带人癌组织或iE常组织 ，癌组织 中也 癌 ，肿瘤的组织病理分级及正常细胞 ，认识 目标组 不能带入正常组织和高级不典型增生组织 。刮取 织和正常细胞的染色情况，能在低倍镜和高倍镜下 后的片子不得重新人放甘油 FE缓冲液中，以防止 快速找到 目标组织 。 污染。刮取过程 中注意无菌 本技术共成功分离 1．2 切 片准备 36例 目标细胞 。 按照世界卫生组织新标准进行病理分级 、分 3 讨论 期 ，手术切除后立 即无菌取材 ，乙醇 固定(DNA工 随着医疗卫生事业的飞速发展，科学研究越来 作状况比甲醛固定好)]，石蜡包埋 ，同时收集患者 越受到人们的重视，我国大部分基层实验室得到了 的相关临床病理资料。每例标本连续切片 1O张， 很大的改观 ，实验水平和实验内容在不断的提升 。 厚度为 5btm，其中一张做 H—E染色 ，对照用 ，余为 对多成分组织切片 ，进行特异性 的同质细胞分离 ， 白片，待用。不可切 的太薄或太厚 ，太薄组织容易 选 出目标细胞是最基本也是最常用的技术 ，手工显 干燥分散 ，切割时不利挖取 ，太厚不易着色 ，不得超 微切割技术具有操作简便 、经济实惠 、准确性较强 过 7 m。 的特点，对组织切片无特殊要求 ，无细胞损伤 ，可 2 方法与结果 获得相对纯的细胞 DN