黄鳝血清转铁蛋白的提取及表征.pdf

第 12卷第 1期 过 程 工 程 学 报 Vol.12 No.1 2012 年 2 月 The Chinese Journal of Process Engineering Feb. 2012 黄鳝血清转铁蛋白的提取及表征 1,2 1,2 1 1,2 王博文 ， 任天瑞 ， 董亚明 ， 王 丰 (1. 上海师范大学生命与环境科学学院；2. 上海师范大学资源化学教育部重点实验室，上海 200234) 摘 要：对从黄鳝血液中提取的蛋白层析纯化后进行生物质谱测试，确定为血清转铁蛋白. 利用十二烷基硫酸钠−聚 丙烯酰胺凝胶电泳、原子力显微镜、圆二色谱法对蛋白的分子量、表面形貌、二级结构进行了表征. 结果表明，该转 铁蛋白分子量为 74 kDa，含量为 0.750 mg/mL，含α-螺旋 29.8% ，β-折叠 6.6%. 关键词：黄鳝；转铁蛋白；十二烷基硫酸钠−聚丙烯酰胺凝胶电泳；生物质谱；原子力显微镜 中图分类号：R284.2 ；Q956 文献标识码：A 文章编号：1009−606X(2012)01−0125−06 条带，同时除去 SDS 及考马斯亮蓝，分离纯化了转铁 1 前 言 蛋白，并进行了铁离子结合实验及光谱分析，结果表明， 黄鳝(Monopterus albus)属合鳃鱼目，合鳃鱼科，黄 转铁蛋白结合铁离子后的特异吸收峰为 467 nm，说明去 鳝属，亦称罗鳝、蛇鱼、长鱼，为热带及暖温带鱼类， SDS 后蛋白仍具有很强的结合能力，用 SDS−PAGE 法 主要分布于中国东南部和泰国、印度尼西亚等东南亚地 测得鲤血清 Tf 分子量约为 74000 Da. 杨严俊等[16]采用 [1,2] [3] 区. 黄鳝有补血补气 、消炎消毒 、除风湿等功 固定化金属螯合亲和色谱法(IMAC)从蛋清中分离和提 效. 其富含二十二碳六烯酸(DHA)和卵磷脂，这些物质 取卵转铁蛋白(OVT), OVT 纯度达 96% ，远高于商品 是人类脑细胞生长不可缺少的营养成分[4]. 黄鳝所特有 OVT 纯度，分子量为 76500 Da. 截至目前，未见对黄 的黄鳝素能调节血糖，其肉质所含脂肪极少，是糖尿病 鳝体内的蛋白质进行生物质谱鉴定、原子力显微镜 人、体虚、产后患者的理想食品. 此外，黄鳝血还可治 (Atomic Force Microscope, AFM)表面形貌表征及圆二 疗口眼歪斜，在中医药方面有很多用途. (Circular Dichroism, CD)色谱测定. 黄鳝在中医学领域的药用价值很大，同时随着分子 黄鳝在我国南方分布广泛，人们主要是食用其肉， 生物学和生物技术的飞速发展,具有生物活性的黄鳝蛋 所以黄鳝血液来源相对丰富且价格便宜，利用率较低， 白和多肽的分离、纯化和鉴定已有报道. 皮建华等[5]制 是一种极为重要的天然药物开发资源，同时也是一种很 备了鳝鱼抗 H 血清；尹绍武[6]观察了黄鳝的红细胞，测 好的药物原材料. 本研究通过研究黄鳝血清蛋白，提取 定了其脱氧核糖核酸(DNA)含量；李联泰等[7]综述了黄 具有药理活性的蛋白质化学组分，开发黄鳝的药用成 鳝研究现状及其活性物质研发的前景，归纳总结了黄鳝 分，提高黄鳝的利用价值. 准确测定了黄鳝血清转铁蛋 遗传学、分子生物学、