绵羊肺腺瘤PCR诊断方法的建立及应用.pdfVIP

动物医学进展。201I，32(10)：24—27 Progressin VeterinaryMedicine 绵羊肺腺瘤 PCR诊断方法的建立及应用 周艳喜，苏 佳 ，李 靖 ，刘霄卉 ，马学恩 (内蒙古农业大学兽医学院，内蒙古呼和浩特 010018) 摘 要：利用特异性PCR方法实现对绵羊肺腺瘤病毒(OPAV)快速精确诊断和病毒类型的分析 。参照 GenBank中公布的外源性绵羊肺腺瘤病毒基 因序列，针对病毒 env基 因YXXM基序设计 了特异性 PCR引 物，建立了特异性 PCR检测方法。成功扩增 出病毒囊膜基 因(env)多变区序列片段 (sT)通过序列比对确定 病毒类型。此方法操作简便 ，可用于绵羊肺腺瘤的快速诊断，可望在绵羊肺腺瘤发病机制等研究中起到重要 作 用。 关键词 ：绵羊肺腺瘤病毒 ；聚合酶链反应；检测 中图分类号：S854．43 文献标识码 ：A 文章编号：1007—5038(2011)10—0024—05 绵羊肺腺瘤 (Ovinepulmonaryadenomatosis， 主细胞基 因组 中，在宿主细胞染色体 中以前病毒 OPA)是 由绵羊肺腺瘤病病毒 (Ovinepulmonaryad— DNA的形式暂时或长期存在 [3]。在绵羊山羊和大 enomatosisvirus，OPAV)引起 的一种肺肿瘤性疾 多数野生山羊属的物种基 因组 中都存在 15拷贝～ 病 。以潜伏期长，咳嗽，呼吸困难 ，大量浆液性鼻漏， 2O拷 贝的内源性绵羊肺腺瘤前病毒 (endogenous 肺泡和支气管上皮肿瘤性增生和病死率高等为主要 OPAV，enOPAV)。与外源性反转录病毒核酸序列 特征。在病羊的多个组织和羊奶中都可以检测到病 有很高的同源性[5]。JSRV 的env基因是个活跃 的 毒粒子，小羊在食用患病母羊羊奶几个月后可感染 基 因能够 引起细胞恶性转化[7]。env基 因的YX- 本病 [1]。各种年龄和品种 的绵羊均能感染 ，但品种 XM 基序是 PI一3K调节亚基 的结合位点。突变 YX— 间的易感性有所差别，以美利奴绵羊的易感性最高。 XM 序列可 以使 env丧失引起细胞恶性转化 的能 近年来也有几起关于 山羊 自然感染本病 的报道。 力。近年的研究表 明JSRV 的env基 因可能通过 SPA呈世界性分布 ，在不 同国家地 区，SPA 的发生 Ras／Raf／MAPK和 PI3K／Akt两种不 同机制 引起 率有显著差异，主要呈地方性散在性流行。当本病 细胞转化 [8]。 首次传人敏感羊群时，发病率可高达 50 ～8O ， 目前 ，本病主要依赖于常规病理学诊断。本研 如冰岛从德国引进感染 的公羊 1年后 ，绵羊开始发 究针对绵羊肺腺瘤 内外源性病毒特征 区设计引物 ， 病 ，在随后 的2年～3年问，羊群中有 6O 的羊遭到 成功排除内源性性病毒 的干扰 ，提高了诊断方法 的 感染和死亡 。在此之后死亡率逐渐下降到 10 以 准确性 ，可望在绵羊肺腺瘤诊断研究和应用 中发挥 下，本病传入后的 10年～12年仅有 29，6～3 的羊 重要作用 。 具有本病的典型病症 [2]。 1 材料与方法 绵羊肺腺瘤病毒是 B反转录病毒 。基因组为单 1．1 材料 链 、线性、负股 RNA，全长 7462bp。基 因组 中除 1．1．1 组织样 品 病羊肺脏组织 由内蒙古农业大 gag、pro、pol、env基 因外 ，在 pol基 因的 3端还有一 学兽医学院病理生理实验室保存 ，经病理剖检确定 个小的 ORFX开放 阅读框 。JSRV感染宿主细胞 为绵羊肺腺瘤。临床检验用绵羊肺脏组织，外周血 后，在 自身编码 的反转 录酶 的作用下合成 病毒