临床研究人血小板裂解液替代胎牛血清促进骨髓间质干细胞的增殖.pdfVIP

·1396 · 南方医科大学学报（J South Med Univ ） 2011;31(8) ·临床研究· 人血小板裂解液替代胎牛血清促进骨髓间质干细胞的增殖 许 茹，夏文杰，戎 霞，叶 欣，邵 媛，王 敏，罗广平，付涌水 广州血液中心输血研究所，广东 广州 510095 摘要：目的探讨人血小板裂解液（human platelet lysates, HPL ）对骨髓间质干细胞（mesenchymal stem cells, MSCs）增殖以 及生物学特性的影响。方法通过对机采血小板反复冻融获得HPL ，采用密度梯度离心法从骨髓中分离MSCs ，分别用 10%胎牛血清（feotal calf serum, FCS）和LD-DMEM 添加不同浓度的HPL 进行培养,以确定最佳HPL 浓度。分离6株人源 MSCs,从原代开始分别用添加胎牛血清和最佳HPL 浓度的LD-DMEM 进行培养，对两种培养体系下6 株不同来源的 MSCs 的增殖能力，表面标记表达量以及细胞周期进行研究，并利用t-test进行统计学分析，P0.05视为有统计学差异。结 果 研究发现HPL 中含有MSCs 生长所必需的4 种生长因子，PDGF-AB（人血小板衍生生长因子AB），bFGF （成纤维细胞 生长因子），IGF- 1（胰岛素样生长因子1），TGF-β1（转化生长因子β1）, 浓度分别为：（0.53±0.06）ng/ml ，（37.5±4.31）pg/ml ， （0.15±0.06）mg/ml ，（5150±463）pg/ml 。适合MSCs 增殖的最佳HPL 浓度为7.5% 。两种培养条件下的细胞形态无明显 区别，均为长梭形。8代以前，细胞增殖能力没有显著性差异（P0.05），两种培养条件下的MSCs 均表达CD105，CD106 以 及粘附分子CD29 和CD44 ，不表达CD34 ，CD45,且其表达量没有显著性差异（P0.05）。两种培养体系下绝大多数细胞 处于G -G 期，FCS 培养的MSCs 其G -G 期占（96.97±0.95）% ，7.5%的HPL 培养的MSCs 其G -G 期占（94.58± 1.56）% ，两 0 1 0 1 0 1 种培养条件下不同周期没有显著性差异（P0.05）。结论本研究适合MSCs 增殖的最佳HPL 浓度为7.5% ，HPL 可以替代 胎牛血清体外培养扩增人骨髓间质干细胞，并保持其生物学特性基本不变。 关键词：骨髓间质干细胞；血小板裂解液；增殖；表面标记；细胞周期 中图分类号：R551 文献标志码：A 文章编号：1673-4254（2011）08-1396-05 Human platelet lysates promotes the proliferation of mesenchymal stem cells in vitro XU Ru, XIA Wen-jie, RONG Xia, YE Xin, SHAO Yuan, Wang Min, LUO Guang-ping, FU Yong-shui Institute of Blood Transfusion, Guangzhou Blood Center, Guangzhou 510095, China Abstract: Objective To investigate the effect of human platelet lysates (HPL) obtained from platelet-rich plasma on the proliferation and biological characteristics of human mesenchymal stem cells (MSCs) in vitro. Methods HPL was obtaine