表达HIV-1复合多表位基因的p815细胞稳定株的建立和评价.pdf

第9卷 第2期 2009年 1月 科 学 技 术 与 工 程 Vo1．9 No．2 Jan．2009 1671．1819(2009)2-0253-04 ScienceTechnologyandEngineering @ 2009 Sci．Tech．Engng． 表达 HIV．1复合多表位基因的p815 细胞稳定株的建立和评价 张 宁 李英辉 赵 亚 刘忠湘 毛张翔 黄豫晓 薛采芳 (第四军医大学病原生物学教研室，西安 710032) 摘 要 建立稳定表达HIV一1p24MEG复合多表位基因的p815细胞克隆。设计引物，以HIV·1标准株全长cDNA序列为模 板，PCR扩增获得p24基因片段；合成改造后的多个表位基因MEG并且与p24片段相连接，克隆入pcDNA3．1(+)。在阳离 子聚合物作用下重组真核质粒转染的p815(H-2)细胞，以G418压力筛选，RT—PCR检测mRNA表达，间接免疫荧光检测蛋白 表达。通过PCR获得 了HIV．1p24片段，获得了与多表位基 因连接后的p24MEG融合基因，成功构建了p24MEG基因的重组 真核表达载体pcDNA3．1(+)／