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第4l卷 分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报 第6期 2013年6月 ChineseJournalof 940～943 AnalyticalChemistry 对克伦特罗具有高特异性的酶联免疫吸附分析法研究 陈小锋1 李瑞芳2 刘曙照“ (扬州大学环境科学与工程学院1，园艺与植物保护学院2，扬州225009) 摘要合成了克伦特罗(CL)半抗原2一(1一(4一氨基一3，5一二氯苯基)．2．(叔丁胺基)乙氧基)乙酸，采用活性酯 法将半抗原与牛血清白蛋白偶联合成免疫原，经免疫、分离、纯化获得抗CL多克隆抗体，建立了对CL具高特 异性的直接竞争酶联免疫吸附分析(de．ELISA)法。本方法对CL检测的线性浓度范围为1．0×10。4— 1．0 10)。特异性实验结果表明：抗体与CL结构类似物沙丁胺醇(SAL)的交叉反应率O．3％，因此本研究所制备 的抗体可有效避免现有克伦特罗ELISA试剂盒、胶体金检测试纸假阳性率高的问题。 关键词克伦特罗；特异性；抗体；酶联免疫吸附分析 1 引 言 统疾病…。将其添加在饲料中，可使猪等畜禽生长速率、饲料转化率、胴体瘦肉率提高10％以上怛J。但是 人食用了含CL的肉制品后会出现心悸、肌肉震颤等中毒症状旧J。2002年，我国农业部176号公告明确规 定，严禁在动物饲养中使用CL，但由于利益的驱使，猪肉等畜禽产品中CL残留超标的情况依然存在。 目前检测CL残留的方法主要有HPLC法~4J、GC．MS法b J、毛细管电泳法∞1和免疫分析法¨8o等。 其中免疫分析法具有成本低、速度快、灵敏度高、仪器设备简单等优点，适合于大批量样品的快速筛查检 测。但是CL结构类似物较多(图1)，而现有cL抗体制备所用免疫原大多采用重氮化法制备归j，本方 法使得CL分子的特异性部位完全被蛋白质大分子掩盖，突出的是CL结构类似物共同结构部分。此 011 外，也有人直接利用抗沙丁胺醇抗体与CL的交叉反应性来检测CL[1J。因此，这些抗体与CL结构类 似物有着较大的交叉反应，从而在实际检测过程中经常出现假阳性的问题¨2。。本研究在cL苯环侧链 的羟基上进行衍生，合成了一种新半抗原，使免疫原突出CL的结构特征，制备出对CL具高特异性的抗 体并以之建立了酶联免疫吸附分析法。 HO HO--、 OH H。℃～少 (c) (d) 图I 克伦特罗(a)及其结构类似物沙丁胺醇(b)、特布他林(c)、马布特罗(d)结构式 Structuralformulaof its of Fig．1 clenbuterol(CL)(a)andanaloguessalbutamol(b)， terbutMine(c)andmabuterol(d) 2实验部分 2．1仪器与试剂 2012-07—13收稿；2012-12-18接受 本文系国家自然科学基金(Nos21247002)资助项目 }E-mail：szliu@yzu．edu．ca 万方数据 第6期 陈小锋等：对克伦特罗具有高特异性的酶联免疫吸附分析法研究 公司)；Trace DSQ液质联用仪(HPLC—MS，美国Finnigan公司)；ALPHA1．2LD冷冻干燥仪(德国Christ 公司)；ELx800酶标仪(美国Bio—Tek公司)。 克伦特罗(cL，金坛市爱德医药原料化工厂)；沙丁胺醇(SAL，盐城制药厂)；牛血清白蛋白