有氧运动对小鼠创面愈合过程脾脏免疫功能及创面VEGF的影响.pdfVIP

摘要 目的 创伤的创面愈合是一个非常复杂而又十分有序的过程，当中有许多细胞参 与，在细胞增殖的同时又分泌多种因子和基质。在免疫细胞、生长因子对创面愈 合影响方面临床研究较多，主要是采用药物干预，而在有氧运动干预方面，国内 外在此方面研究较少。 长期适量的有氧运动能强身健体，提高心肺功能，这是普遍的共识。本研究 试图通过对正常小鼠以及免疫抑制模型小鼠受伤后的有氧运动干预，探讨有氧运 动干预对创面愈合时脾脏介导的免疫功能及 VEGF 表达的影响，揭示有氧运动 干预对创面愈合影响的分子及免疫机制，为有氧运动疗法在临床中的应用提供实 验参考。 方法 本研究选择SPF 级8 周龄70 只健康昆明小鼠为实验对象，小鼠全部为雄性。 小鼠按体重分层被随机分为四组：A 组 （创伤+运动）、B 组 （创伤+安静）、C 组 （免疫抑制+创伤+运动）、D 组 （免疫抑制+创伤+安静）。小鼠常规饲养适 应环境3 天后，C、D 组腹腔注射氢化可的松0.5mg/天、连续注射7 天造成免疫 抑制模型。A、B 、C、D 组进行转轮式疲劳仪运动适应3 天后，参照付小兵等创 面造模方法进行创伤造模。造模后第二天开始进行有氧运动干预。有氧运动干预 参照K. Todd Keylock 等的方法，采用小鼠转笼运动。以15r/min，20min/次/天， 持续10 天实施有氧运动干预。在创伤后第1 天、第3 天、第6 天、第9 天对创 面进行透明膜描记和拍照，用图像分析软件计算创面愈合速率。分别在伤后第3、 6、9 日运动后3 小时末取材，伤后第3 天为第一次取材，每组处死5 只，伤后 第 6 天为第二次取材，每组处死 6 只，伤后第9 天为第三次取材，每组处死 6 只。无菌摘取脾脏和胸腺分别称重计算脾脏系数（SC）与胸腺系数(TC) 。MTT 法测定脾B 淋巴细胞增殖能力(SB)和脾T 淋巴细胞增殖能力(ST) 。取肉芽组织采 用免疫组化法测VEGF 表达。 结果 注射氢化可的松7 天后，C、D 组小鼠出现萎靡不振、毛色无光泽、弓背少 动，眼睁不开，有畏寒蜷卧，反应迟钝，体重下降等现象。创伤造模后以上情况 I 加剧，两组各有一只死亡。经过血液白细胞技术检测，C、D 组白细胞数量显著 低于正常组A、B 组，综上判断小鼠氢化可的松免疫抑制模型建立成功。 HE 染色结果，B 、D 组伤后第3 天伤口有大量炎性细胞浸润，伤后第6 天 仅表现为部分组织开始修复，周边炎性细胞浸润； A 、C 组小鼠创面炎症细胞 较稀疏，创面胶原较少，伤后第9 天染色观察大部分组织开始修复。A、C 组能 够尽快抑制创伤早期的渗出及炎性反应、促进肉芽组织修复性增生；而 A 组在 在创伤修复中期能够更好的促使肉芽组织修复，肉芽组织相对致密、均匀。 四组在伤后第3 天都表现出较高的白细胞水平。随着运动天数的增加，运动 组白细胞下降幅度显著大于安静组（A ＞B ，C ＞D ）。说明伤后适量运动可以加 速炎症消除，从而提高机体抗损伤水平。这与Keylock 研究结果一致。 随着伤后有氧运动天数的增加，运动组脾脏系数与胸腺系数上升均显著大于 安静组（A ＞B ，C ＞D ）；表明有氧运动提高免疫抑制小鼠机体免疫力。 经过九天伤后有氧运动，A、C 组小鼠脾脏T 淋巴细胞对刀豆蛋白A(ConA) 诱导增殖能力与脾脏B 淋巴细胞对LPS 诱导增殖能力显著高于B 、D 组显著高 于B 、D 组（P ＜0.01 ）。说明运动组小鼠的脾脏T 淋巴细胞和B 淋巴细胞的机能 活跃程度高于对照组小鼠，结果提示，有氧运动可能有助于增强脾脏 T 淋巴细 胞与脾脏B 淋巴细胞的功能。 免疫组化结果显示，在皮肤创伤修复过程的早期 （D3 ）VEGF 的表达A、 C 组呈阳性，B 、D 组呈弱阳性。在造创6 天后（D6 ），A 、C 组VEGF 的表达同 时达到峰值，B 、D 组VEGF 的表达为阳性，这与创伤愈合过程中新生血管形成 的时间相似。创伤修复晚期（D9 ），A、C 组肉芽组织增生已达顶峰，开始逐渐 聚拢为团状，此时VEGF 的表达为强阳性，而B 、