提取地衣真菌总DNA的简便方法3.pdfVIP

第 19 卷　第 4 期 北 京 林 业 大 学 学 报 . 19, . 4 V o l N o 1997 年 10 月 . , 1997 JOU RNAL O F BE IJ IN G FOR ESTR Y UN IV ER S IT Y O ct 提取地衣真菌总DNA 的简便方法 1) 2) 2) 3) 2) 时向阳 　魏江春 　姜玉梅 　田素忠 　郭守玉 摘要　利用液氮破碎地衣体的上下表皮层及藻层, 再用氯化苄在弱碱条件下破坏真菌细胞壁, 从 而获得地衣真菌总DNA. 此方法简便、省时、价廉, 获得的总DNA 蛋白质污染少, 产量高, 可 进一步进行 PCR 扩增. 关键词　地衣真菌, 地衣体, 总DNA , 氯化苄, 真菌细胞壁, PCR 扩增 中图分类号　 939. 533 Q 随着真菌分子生物学的发展, 各种DNA 分析技术对DNA 的质量要求日益增高. 多种真 [ 1, 2 ] ( ) 菌的DNA 提取方法已见报导 . 真菌与藻 蓝藻、绿藻或蓝细菌 共生的地衣体, 真菌菌 丝常被坚硬的上、下皮层及紧密的藻层所包围, 提取地衣真菌DNA 存在一定困难, 但也有报 [ 3～ 7 ] 导 . 作者在前人方法的基础上, 摸索了一套简便、易行的提取地衣真菌总DNA 方法: 首先用 液氮破碎地衣体的上下皮层及藻层, 再使氯化苄在弱碱条件下与真菌细胞壁多糖上的羟基作 用而生成醚, 从而使多糖链断裂, 使细胞壁破裂而释放胞内DNA . 用这种方法已成功地获得 了十几种地衣真菌总DNA , 其总DNA 含蛋白质少、降解不明显、产量较高、重复性好. 获 [ 8 ] [ 9 ] 得的地衣真菌总 可用于 扩增. 这一简易方法与 , 氯化苄 等法相比, DNA PCR SD S CTAB 具有简便易行、成本低且质量好等优点. 1　材料与方法 1. 1　材　料 1. 1. 1　供试地衣真菌样品　地衣真菌样品均取自中国科学院真菌地衣系统学开放实验室地 衣标本室 (HM A S- L ) 低温冰箱 (- 30 ℃) 中保存的地衣干标本. 其编号分别为: 81 Um bilica ria vellea (石耳科) 67 N ep h rom a sp (地卷科) 113 U. m am m u la ta (石耳科) 1