以L-谷氨酰胺–锌(II)配合物为供体酶法制备茶氨酸及其反应机理.pdfVIP

第 12卷第2 期 过 程 工 程 学 报 Vol.12 No.2 2012 年 4 月 The Chinese Journal of Process Engineering Apr. 2012 以 L-谷氨酰胺–锌(II)配合物为供体酶法制备茶氨酸及其反应机理 胡国梅， 姚 忠， 王浩琦， 周 治， 熊 强， 徐 虹， 韦 萍 (南京工业大学食品与轻工学院，江苏 南京 210009) 摘 要：针对酶法合成茶氨酸中存在的自转肽副反应，合成了 L-谷氨酰胺−锌(II)配合物 Zn(Gln) ，以其为供体、乙胺 2 为受体、枯草芽孢杆菌B. subtilis GGT 为催化剂，酶法制备茶氨酸. 结果表明，Zn(Gln)2 在反应主体相稳定性良好， 以Zn(Gln)2 为供体可有效抑制自转肽副反应；B. subtilis GGT 对 Zn(Gln)2 和 Gln 的亲和力常数分别为0.53 mmol/L 和 1.01 mmol/L. 在 Zn(Gln)2 6.0 mmol/L 、乙胺200 mmol/L 及 GGT 0.5 U/mL 条件下，经 37 ℃反应2 h ，茶氨酸浓度最高 可达 7.38 mmol/L，较以 Gln 为供体时提高了 14.42%. 关键词：L-茶氨酸；γ-谷氨酰转肽酶；L-谷氨酰胺-锌(II)配合物；酶法合成；自转肽 中图分类号：Q556.3 文献标识码：A 文章编号：1009−606X(2012)02−0283−05 1 前 言 二价金属配合物作为供体参与 GGT 反应的可行性；同 L-茶氨酸(Theanine)是茶叶的特征氨基酸，也是茶 时通过质谱分析反应机理，为进一步丰富 GGT 的酶学 叶的主要呈味物质之一，具有抑制神经活动、影响脑内 研究、拓展酶法合成茶氨酸技术提供理论和技术支撑. 神经传达物质多巴胺的代谢和释放、保护神经细胞、降 [1] 2 实 验 血压及增强抗癌药物的疗效等独特的生理功能 . [2,3] 、微生 2.1 材料与试剂 目前，茶氨酸的制备方法主要有提取法 [2] [4] [5] L-茶氨酸标准品(纯度98% ，德国 Sigma 公司) ， 物发酵法 、化学合成法 和酶法 . 其中利用γ-谷氨酰 转肽酶[γ-Gutamyltranspeptidas, GGT, E.C.2.3.2.2]的酰基 Gln(色谱纯，上海国药集团) ，甲醇(CMW 公司) ，三氟 转移活性制备茶氨酸的方法极具产业化应用前景. 乙酸、甲醇钠和 Zn(AC) .2H O 均为国产分析纯，GGT 2 2 Suzuki 等[5] 以E . coli K-12 GGT 为催化剂、L-谷氨酰胺 为实验室自制，纯度大于 95%. (Gln)为γ-谷氨酰供体、乙胺为受体，一步法合成了 L- 2.2 主要实验仪器 [6−14]在构建 DIONEX Ultimate 3000 高效液相色谱仪(HPLC，美 茶氨酸，谷氨酰胺转化率为 60%. 国内学者 GGT 工程菌及酶法合成茶氨酸方面也开展了大量研究. 国戴安公司) ，Micro Mass Q-TOF 电喷雾质谱仪 但由于目前研究