乙烯类激素法高效提取与分析牛肉、猪肉、鱼肉中的兽药残留二苯.pdfVIP

青云通讯 QuEChERS法高效提取与分析牛肉、猪肉、鱼肉中的兽药残留二苯 乙烯类激素 摘要：本文利用QuEChERS 法提取牛肉、猪肉、鱼肉中的二苯乙烯类激素，结 合液相色谱法检测牛肉、猪肉、鱼肉中二苯乙烯类激素的含量，样品的检测结 果令人满意。在实验研究确立的QuEChERS 法提取的最佳条件下，二苯乙烯类 激素标准品的浓度在一定范围内呈线性关系，对猪肉鱼肉牛肉样品进行了测定， 加标回收率在80.4%~98.2%之间。 1. 引言 二苯乙烯类激素为人工合成的雌激素类物质,主要包括己烷雌酚(hexestrol ， HEX) ，己烯雌酚(diethylstilbestrol，DES)和双烯雌酚（dienoestrol，DEN ），在 畜牧业中被广泛用于动物的育肥，尽管它们有很大的应用价值, 但是滥用二苯乙 烯类药物会产生一系列的副作用，比如动物内分泌系统失调，并通过食物链最 终危害人类健康,干扰内分泌，影响生殖、 性别分化及生长发育，甚至可以导致 一些器官（如胸部，卵巢，前列腺,睾丸）的癌变。因此，快速准确地检测动物 性食品中二苯乙烯类激素对于维护食品安全是非常必要的。 动物性食品中二苯乙烯类激素的测定主要采用叔丁基甲基醚等有机溶剂通过 液液萃取提取、固相色谱净化等复杂前处理过程，操作繁琐、回收率偏低。 QuEChERS (quick, easy, cheap, effective, rugged, safe)方法集基质去除与样品净化 为一体，具有快速、简便、廉价、有效和安全的特点，在蔬菜农药残留测定中 得到广泛应用。本文在深入研究二苯乙烯类激素药物在基质中存在状态的基础 上，参照QuEChERS 方法，用80% 乙腈作为提取液，提取动物性食品牛肉、猪肉 与鱼肉中的药物残留，结合液相色谱法实现了二苯乙烯类激素的快速准确测定。 2. 实验部分 2.1 仪器与试剂 安捷伦1100 液相色谱仪，配有二极管阵列检测器（美国安捷伦公司）； Cary Eclipse 荧光分光光度计（美国Varian 公司），配有恒温装置。TU-1901 双 光束紫外可见分光光度计（北京普析通用公司）。THZ-312 型台式恒温振荡器 （上海精宏实验设备有限公司）,QL-861 型涡旋仪（海门其林贝尔仪器制造有 限公司） 已烷雌酚（HEX ），己烯雌酚(DES) ，双烯雌酚(DEN)标准品（纯度92.0% ~ 97.0%，中国药品生物制品检定所）；牛血清白蛋白（纯度98% ，分子量 68000 ），购自购自Sigma公司，溶于pH=7.4 的Tris-HCl缓冲溶液，储备液浓度 -3 -1 为1.0×10 mol·L ，乙腈，无水乙醇，异丙醇，四氢呋喃（色谱纯，天津科密欧 公司）；磷酸氢二钾, (K2HPO4) 与 磷酸氢二钠(Na2HPO4) （分析纯，上海优浦 科学仪器有限公司）牛肉、猪肉与鱼肉样品购于烟台佳世客超市，水为二次蒸 馏水。 标准溶液的配制：己烷雌酚，己烯雌酚，双烯雌酚用甲醇配置成浓度为1000 μg/mL单一标准和混合标准储备溶液，4 ℃冰箱内储存。 液相色谱条件：C18色谱柱（250 mm×4.6 mm ）；色谱柱温度为40 ℃；流动相为 甲醇-0.01 mol/L磷酸氢二钠（61:39 ）；流速为1.0 mL/min ；检测波长为230 nm ，进样量20 μL。 3.结果与讨论 3.1 样品前处理步骤 传统的QuEChERS技术适合测定含水量较多的果蔬样品，对于动物性食品由于 药物与蛋白质的结合作用，应考虑蛋白质充分变形释放结合药物才能得到好的 回收率。为此我们采用青云MQ3产品拟定了如下样品提取与净化步骤。 （1）初步均质的肉类、水产品，称取10g，加入2ml 水，充分均质处理，加 入50mL 萃取管中。（加入标准物质溶液） （2 ）向萃取管中加入乙腈10mL （3 ）高速匀浆或涡旋振荡2-3min （4 ）将盐包剪开，将盐全部加入萃取管中 （5 ）高速匀浆或涡旋振荡1-2min ，3000 rpm/min ，离心3-5min （6 ）使用针筒净化器抽取上清液，震荡1-2 min 进行净化；净化剂为 150mg 无水硫酸镁/ml ，50mg/ml PSA 与25mg/ml C18 混合物。 （7 ）然后在净化器上装上过滤头