番茄叶片基因组DNA快速制备技术及其在基于实时荧光定量PCR的转基因检测中的应用.pdfVIP

遗 HEREDITAS(Beijing)2011年9月，33(9)：1017—1022 ISSN0253-9772 WWW．chinagene．CR 技术与方法 DoI：10．3724／SP．J．1005．2011．01017 番茄叶片基因组DNA快速制备技术及其在基于实时 荧光定量 PCR的转基因检测中的应用 王伟伟，朱长青，刘小花，陈昆松，徐 昌杰 浙江大学农业与生物技术学院园艺系，杭州 310058 摘要：以番茄(SolanumlycopersicumL．CV．Micro-Tom)~-片为试材，建立了一种简便快速制备叶片基因组DNA 的方法。2～20mm 的叶片即可满足制备要求，制备过程只需一种提取试剂、只涉及 1次移液和 1次离心操作，不 涉及沉淀。确定了所制备的DNA用于实时荧光定量 PCR的合适用量为 0．1～0．2gL(反应总体积为 12．5pL)，发 现过量模板的使用可降低 PCR效率且可导致扩增失败。该项DNA快速制备及相适应的实时荧光定量 PCR技 术已成功应用于番茄转基因植株检测。 关键词：番茄；DNA快速制备；实时荧光定量PCR；转基因检测 TechniquesforrapidpreparationoftomatoleafDNA and itsappli- cationinreal-timequantitativePCR-basedtransgenedetection WANGWei—Wei，ZHUChang—Qing，LIUXiao—Hua，CHENKun—Song，XUChang—Jie DepartmentofHorticulture，CollegeofAgricultureandBiotechnology，Zh~iangUniversity，Hangzhou310058，China Abstract：Usingtomato(SolanumlycopersicumL．CV．MicroT·om)leafasmateria1．asimpleandrapidDNApreparation protocolwasestablished．Thismethodrequiredonly2-20inin leafwithonlyoneextractionsolutionandinvolvedone pipetationandonecentrifugationeach．Noprecipitationwasrequired．ThesuitablevolumeofpreparedDNAsolution，as PCR template．forrea1．timequantitativePCR wasdeterminedtobe0．1-0．2gLin 12．5gL finalreactionvolume．Theex— cessivetemplateDNA solutionwasconfirmedtoreducePCRe币ciencyandevencanresultinPCR failure．Thistechnique ofrrapidpreparationofDNAandacompatiblereal—timequantitativePCRweresuccessfullyappliedinffansgenedetection oftomatoplants． Keywords：tomato；rapidDNApreparation；real-timequantitativePCR；transgenedetection 1983年首例转基因烟草植株的获得将植物生物 其是植物功能基因组学研究必不可少的一项技术。 学研究引人了转基因时代，20余年来，转基因技术 由于在基因转化过程 中所获得的抗性植株不一定全 已发展成为植物生物学研究与应用的重要手段，尤 是转基因植株，因此，转基因检测是植物转基因研 收稿 日期：2010-12—21：修 回日期：2011—05—18 基金项 目：国家重点基础研究发展计划(973计划)项 目(编号：2011CB100602)，国家 自然科学基金重点项 目(编号和浙江省 自然科学 基金重点项 目f编号：Z3100171)资助 作者简介：王伟伟，硕士研究生，专业方 向：园艺植物生物技术。E—mail：weilwkl@163．tom 通讯作者：徐昌杰，教授，研究方