鸡γ-干扰素的可溶性表达及纯化产物的抗NDV活性.pdfVIP

第42卷第9期 东 北 农 业 大 学 学 报 42(9)：37-42 2011年9月 JournalofNortheastAgriculturalUniversity Sep．2011 鸡y一干扰素的可溶性表达及纯化产物的抗NDV活性 代 丽，单安 山，孙进华，尹佳佳 ，李远见 (东北农业大学动物营养研究所，哈尔滨 150030) 摘 要：将鸡_y一干扰素(chlFN-3,)基因先克隆，接着通过大肠杆菌表达后进行产物纯化与活}生检测。通过PCR 方法以带有信号肽的重组质粒PMD一18T—preIFN一^y为模板，扩增无信号)chlFN-7基因片段 ，克隆至原核表达载 体pProEXMTHTa，构建重组表达质~pProEX HTa—chIFN一，在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导表达，然后利 用Novagen蛋白纯化试剂盒进行天然纯化可溶性蛋 白，并进行SDS—PAGE、Westernblot鉴定，同时利用CEF—NDV 系统测定抗病毒活性。结果表明，459bp的chlFN-T成熟蛋白编码基 因被成功克隆，同时c，FⅣ 蛋白在大肠杆 菌中也获得 了成功表达，分子质量约为20ku，能与抗His的单克隆抗体发生特异性反应。表达蛋白一部分形成包 涵体，另一部分以可溶形式存在，可溶性蛋白经镍柱在天然条件下的纯化得率约为1．9mgm·L-。生物学活性试验 表明，1：5稀释纯化的重组c，Ⅳ-^y(rc，刚一)孵育CEF细胞后能抵抗 100TCID50的NDV(新城疫Ⅳ系弱毒苗)攻 击。研究纯化获得的rchlFN-3~-g．-有较好的抗病毒活性 ，为研制新型抗病毒干扰素制剂奠定基础。 关键词：鸡^y一干扰素；克隆；可溶性表达；病毒活性 中图分类号：$826 文献标识码：A 文章编号：1005—9369(2011)09—0037—05 Soluble expression of chicken interferon-gamma and activity of purifiedexpressionproductagainstNDV／DAILi，SHANAnshan，SUNJinhua，YIN Jiajia，LIYuanjian(InstituteofAnimalNutrition，NortheastAgriculturalUniversity，Harbin150030， China) Abstract：chlFN-y mature proteingenewasamplified by RT-PCR fr0m recombinantPMD一18T- prelFN-yandthen clonedinto the prokaryoticexpressionvectorpProEXTMHTa．Recombinantexpression plasmidofpProEXTMHTa-chlFN-ywasocnstructedandhtentransformde intohteocmpetentE．coliBL21(DE3) cellsforexpression 、I，『ith IPTG induction．Purified soluble rchlFN-y proteinswere obtained by His．Bind PurificationKit(Novagen)andidentifide bySDSgelandWestem blotassay．Theantiviralactivitywas detectde byCEF-NDV system．A 459 bp cDNA encoding chlFN-y mature protein genewasclonedand successfullyexpressde inEco／／withapproximate molecularweightof20 ku，whichcouldberecognizde by anti-HismAbagainstchlFN-y