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中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2011, 33(4): 385-390 http ://www.cj
技术与方法
用Fugene6制作高滴度慢病毒方法的优化比较
1 2 1 3 1 1*
范 霖 马志昭 高山峨 路建伟 李思光 潘晓静
(1 , 200092 2 050000
同济大学医学院胚胎干细胞研究中心 上海 ; 河北医科大学第二医院神经外科, 石家庄 ;
3 , 200092)
同济大学医学院胚胎干细胞库 上海
,
摘要 针对实验室中比较普遍的包装的慢病毒滴度不高的问题 我们对慢病毒包装过程中
Fugene6 GFP
的几个关键步骤进行了优化。采用 同时转染携带 的质粒和包装慢病毒所必需的包装
293T GFP GFP
质粒进入 细胞中。通过使用荧光显微观察 的表达亮度及流式细胞技术测量 阳性细胞
Fugene6 DNA , Fugene6 DNA 3:1
的比例来测定病毒滴度。通过优化 和 的比例 发现当 和 的比例是 时获
; , 48
得的慢病毒的滴度最高 通过对转染后收获病毒的时间的比较 发现转染 小时后回收所得到的慢
病毒滴度最高。
关键词 慢病毒; 滴度; Fugene6
目前, 慢病毒载体已经成为体外细胞感染的一 行慢病毒滴度的测定[10] 。
种高效的手段。慢病毒载体较逆转录病毒载体有更 本研究的目的在于针对用Fugene6包装慢病毒
广的宿主范围, 对非周期性和有丝分裂后的宿主细 过程中的两个主要步骤: Fugene6和DNA 的比例以及
胞都能够有效地进行感染[1,2] 。加之安全、低毒性、 转染后收获慢病毒的时间的比较, 从而获得高滴度
稳定的特点, 使慢病毒作为实验室研究工具而大受 的慢病毒。
青睐。
出于安全性的考虑,慢病毒基因被分隔成三到 1 材料与方法
[3,4]
四个基因进行包装 , 目前在实验室常用的是三质 1.1 主要试剂
粒系统[5] , 293T
。在慢病毒的包装过程中 需要在 细 (Thermo) Gibco L-
胎牛血清 、非必需氨基酸( )、
胞中同时转染包膜蛋白质粒、整合质粒和携带外源 Glutamine Gibco DMEM Gibco Fugene6 Roche
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