离子交换层析技术.pdfVIP

离子交换层析技术 离离子子交交换换层层析析技技术术 主要内容： 1．离子交换层析原理 2．离子交换剂 3．离子交换层析实验方法 4．离子交换层析注意事项* 5．离子交换层析常见问题分析 离子交换层析原理 离子交换色谱（Ion Exchange Chromatography IEC）原理是带电的生物大分子 和离子交换色谱填料上的离子基团进行交换而被分离纯化。以离子交换剂为固定相，依据流 动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时的结合力大小的差别而进行分离。 能够分离和提纯蛋白质、核酸、酶、激素和多糖等。 离子交换剂 选择离子交换剂的一般原则 1. 11.. 选择阴离子抑或阳离子交换剂，决定于被分离物质所带的电荷性质。如果被分离物质带 正电荷，应选择阳离子交换剂；如带负电荷，应选择阴离子交换剂；如被分离物为两性离子， 则一般应根据其在稳定pH 范围内所带电荷的性质来选择交换剂的种类。 2. 22.. 强型离子交换剂使用的pH 范围很广，所以常用它来制备去离子水和分离一些在极端pH 溶液中解离且较稳定的物质。 3. 33.. 离子交换剂处于电中性时常带有一定的反离子，使用时选择何种离子交换剂，取决于交 换剂对各种反离子的结合力。为了提高交换容量，一般应选择结合力较小的反离子。据此， 强酸型和强碱型离子交换剂应分别选择H型和OH 型；弱酸型和弱碱型交换剂应分别选择 Na 型和Cl 型。 4. 44.. 交换剂的基质是疏水性还是亲水性，对被分离物质有不同的作用性质，因此对被分离物 质的稳定性和分离效果均有影响。一般认为，在分离生命大分子物质时，选用亲水性基质的 交换剂较为合适，它们对被分离物质的吸附和洗脱都比较温和，活性不易破坏。 常用离子交换剂的种类与特性 1. 11.. 离子交换纤维素 离子交换纤维素的种类很多，其种类与特性如表1-1 所示。 1 表1-1 离子交换剂的类型与特点 交换剂 名称（纤维素） 作用基团 特点 二乙氨基乙基 DEAE+-O-C2H4N+(C2H5)2H 最常用在pH8.6以下 阴离子 三乙氨基乙基 DEAE+-O-C2H4N+(C2H5)2H 交换剂 氨乙基 AE+-O-C2 H4-N H2 胍乙基 强碱性、极高pH仍有效 羧甲基 CM—-O-CH2-COO— 最常用在pH4以上 阳离子 磷酸 P－-O- P O2－ 用于低pH 交换剂 磺甲基 SM－-O-CH2-SO3－ 磺乙基 SE－-O-C2H4-SO3－ 强酸性用于极低pH 在交换纤维素中，最常用的是DEAE-纤维素和CM 纤维素。由于剂型不同，其理化性质 和作用也有所差异。一般而言，微粒型要优于纤维素型，因为微粒型是在纤维素型的基础上 进一步提炼而成。它的交换容量大，粒细、比重大，能装成紧密的层析柱，要求分辨力高的 实验可用此型纤维素（见表1-2）。表1-2 商品DEAE-纤维素和C M 纤维素的类型和特 性 蛋白质吸附容量 床体积（ml/g） 纤维 交换当量 形状 长度 （mg/g牛血清白蛋 素 （毫克当量/克） 白） pH 6.0 pH 7.6 12- DE-22 改良纤维