酒酒球菌基因组DNA提取及RAPD反应体系优化.pdfVIP

年第年第 期期（（总第总第 期期））·· )) 46 酿酿酒科技酒科技 44 178178 LIQUORLIQUOR－－MAKINGMAKING SCIENCESCIENCE ＆＆ TECHNOLOGYTECHNOLOGYNoNo．．44((TolTol．．178178 酒酒球菌基因组DNA 提取及RAPD 反应体系的优化 李西柱，刘树文，王坐京，周利国 （西北农林科技大学葡萄酒学院；陕西省葡萄与葡萄酒工程技术研究中心，陕西 杨凌 712100) ： 摘 要 以酒酒球菌SD-2a 为试验材料，研究了酒酒球菌基因组DNA 的提取方法，对影响RAPD-PCR 反应体系 的主要因素进行了优化，最终建立了适合于本实验室的RAPD 反应体系。结果表明，采用改良的传统细菌基因组 DNA 提取方法，所提取的DNA 质量较高，能够满足RAPD 反应的需要；建立的RAPD-PCR 反应体系为：25 μL 反 应体积、1.0 UTaq 酶、160 μmol/L dNTP 、0.4 μmol/L 随机引物、3.0 mmol/L Mg2+、10 ng 的DNA 模板用量；PCR 反应 程序为：94 ℃变性300 s，1 个循环；94 ℃变性60 s，36 ℃退火60 s，72 ℃延伸90 s，45 个循环；72 ℃延伸300 s。 关键词：微生物；酒酒球菌； DNA 提取； RAPD ； 优化 ： ： ： （ ） 中图分类号 Q93-3 ；Q78 文献标识码 A 文章编号 1001－9286 2009 04－0046－05 Genomic DNA Extraction and the Optimization of RAPD Reaction Conditions of Oenococcus oeni LI Xi-zhu, LIU Shu-wen, WANG Zuo-jing and ZHOU Li-guo （College of Enology of Northwest AF University, Shanxi Engineering Research Center for Viti-Viniculture, Yangling, Shanxi 712100, China) Abstract: In this study, Oenococcus oeni was used as experimental materials. The method of genomic DNA extraction was studied in Oenococcus oeni and the primary conditions of RAPD-PCR were optimized. Finally, RAPD reaction system suitable for our lab was established. The results showed that high-grade genomic DNA which could meet the requirements of RAPD reaction was obtained by the modified methods. The estab- lished RAPD-PCR reaction system was as follows: 1.0 UTaq polymerase, 160 μmol/L dNTP, 0.4 μmol/L rand