红树林沉积物的真菌多样性及其代谢产物的生物活性研究.pdf

汕头大 学 2013 硕士 论文 中文摘要 红树林是 指自然分布在热带、 亚热带海岸潮间带的木本植物群落, 通常 生长在港湾河 口地区 淤泥质滩涂上。 红树林沉积物具有强酸性、 强还原性、 高有机质、 高含盐量 等特征, 蕴含着 极为丰富、极具特色 的微生物资源。然而,目前对红树林的研究多集中在植物学、 生态学、 造林学等领域, 在红树林沉积物真菌 的研究甚少。 红树林沉积物 真菌是一个重要 的生物 资源库,是农业、医学和工业 所需新型天然活性物质的重要来源 。 本研究以福建漳江口红树林国家级自然保护区红树林沉积物为研究对象, 利用可培养 分离法研究红树林沉积物中真菌类群组成多 样性, 并利用平板共滞法 进行抗茶叶病原真菌 的活性筛选,CCK8 法进行肿瘤细胞毒活性筛选 。同时通过人工诱变方法对 茶叶病原真菌 Pestalotiopsis theae 进行致病缺陷诱变 。 通过 对8 个样品分离培养得到 1276 株, 初步整理 为 135 株真菌, 通过形态学和 InternalTranscribed Spacer of ribosomal DNAITSrDNA序列测定 进行鉴定 , 并 建 立 了 系 统 进 化树进行 多 样 性分析分析, 子囊菌门真菌占据红树林沉积物真菌群落的绝大部分91.5% , 而担子菌门占 2.1% , 接合 菌门占 6.4% 。所 得真菌 归为 47 个种系型, 分属于 17 个属,其 中青霉属 和曲霉属为优势菌 属,总样品的 Shannon-Wiener 和 Simpson 多样性指数为 4.01 和 0.901 , 均匀度为 0.795 , 显示出丰富的多样性 ; 利用平板共滞法对真菌 代谢产物进行抗 茶 叶 病 原 真 菌 生 物 活 性 实验 发现 :共 有 22 株 占 46.8% 具 抗 真 菌 活 性 , 活 性 菌 中 抑 制 Pestalotiopsis theae LH13 的真菌 17 株,抑制 Colletotrichum gloeosporioides LH30 的真菌 14 株,抑制 Neofusicoccum sp. LH107 的真 菌 9 株。这些菌株分布在 7 个属,其中以青霉 属、镰孢属、木霉属、曲霉属为主。 用 CCK8 法检测 47 株红树林 沉积物 来源真菌发酵液 粗提物的细胞毒活性, 以 100?g/ml 的浓度下抑制率大于 70% 为阳性为判断标准, 统计发 现阳性率 14-19% ,其 中 BEL7402 肝癌 阳性 6 株、HT1080 纤维肉 瘤 阳性 9 株、Hl60 急 性早幼粒细胞白血病 阳性 7 株。以孢子致死率 70-85% 为依据对 Pestalotiopsis theae LH13 进行紫外诱变, 通过健 康茶叶叶片致病性实验筛选出致病缺陷型菌株 3 株和减毒株 19 株。 本文的研究工作 对探明海洋真菌在我国红树林生态系统的 群落结构, 有效利用和保护 红树林微生物资源, 开发新型药物先导化合物和生物农药 奠定了基础。 关键词: 红树林沉积物; 真菌多样性; 生物活性; 茶叶病原真菌; 紫外诱变I 汕头大 学 2013 硕士 论文 Abstract Mangrove is unique inter-tidal wetland ecosystems found in sheltered tropical and subtropical shores. Mangrove sediments have the characteristics of strong acid, strong reduction, high organic matter, high salt, and represent rich and diverse microbial resources. However, mangroves are more concentrated in the field of botany, ecology, silviculture, little studied in the mangrove sediment fungi. The fungi in mangrove sediments has been shown to be potential source of novel natural products useful in medicine, agriculture and industry, and provide rich resources for screening of active compounds against pathogenic fungi of tea plant